專利名稱：鼠尾草酸及其在藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防或治療腦梗塞的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中草藥單體鼠尾草酸或鼠尾草酸在藥學(xué)上可接受的鹽作為單一成分或與其他藥學(xué)上可接受的成分構(gòu)成組合物在制備預(yù)防或治療腦梗塞的藥物的應(yīng)用，尤其是腦缺血導(dǎo)致腦梗塞。
背景技術(shù)：
腦缺血病已成為我國主要的病死原因之一。對急性缺血性腦卒中的治療，國內(nèi)外尚缺乏較好的治療藥物。美國FDA于1996年批準(zhǔn)第一個(gè)治療該病的溶栓藥t-PA，由于有顱內(nèi)出血高的不良反應(yīng)，對其療效尚有爭議。對各種類型腦保護(hù)劑的研究結(jié)果表明，很多藥物臨床療效不夠好，或有較嚴(yán)重副作用。有幾個(gè)藥物仍在臨床驗(yàn)證階段。
鼠尾草酸(Carnosic acid)是唇形科(Labiatae)迷迭香屬迷迭香Rosemary (Rosemary officinalis L.)中的一種植物酹酸類化合物。迷迭香原產(chǎn)地中海沿岸國家，現(xiàn)在世界各地廣為栽培，近年來，在我國廣西、云南、浙江、貴州、海南和新疆等地均有大面積種植。鼠尾草酸其分子式為C20H2804，分子量為332. 43，其結(jié)構(gòu)式為
OH I
η°\ΑΛ
HOOC鼠尾草酸具備多種藥理學(xué)活性。研究表明，鼠尾草酸具有抗氧化作用；對鼠3T3-L1脂肪細(xì)胞的分化及人動脈平滑肌細(xì)胞的遷移具有抑制作用；能夠逆轉(zhuǎn)P-糖蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥性；同時(shí)鼠尾草酸具有抗腫瘤活性，能夠抑制I，25- 二羥維生素D及視黃酸誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞增殖的藥理學(xué)作用。鼠尾草酸對dieldrin-induced(狄氏劑誘導(dǎo)的)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞死亡產(chǎn)生有利影響，CA通過提高腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子和抑制細(xì)胞凋亡，可能從環(huán)境神經(jīng)毒素中保護(hù)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞。目前還沒有鼠尾草酸作為預(yù)防或治療腦梗塞藥物使用的報(bào)道。中國專利CN1600303A公開了鼠尾草酸抑制柯薩奇病毒的活性，特別是柯薩奇B3型病毒活性新用途，可用于抑制柯薩奇病毒活性，特別是制備治療柯薩奇病毒感染疾病的藥物。中國專利CN1698587A公布了一種迷迭香有效部位，該有效部位的主要成分鼠尾草酸和鼠尾草酚的含量只和在13%以上，該迷迭香有效部位可以用于制備預(yù)防和治療心血管、環(huán)緩解胸痹心痛癥的藥物，還可用于制備治療子宮癌、宮頸癌、腸癌、乳腺癌的藥物。中國專利CN101040901A公開了一種從迷迭香中制備抗氧化產(chǎn)品的方法，說明鼠尾草酸具有抗氧化活性。中國專利CN101115531A公開了在潔牙劑組合物中加入迷迭香提取物得到適于治療和預(yù)防包括牙齦炎、牙菌斑集聚等的各種口腔疾病的牙膏、口腔清洗劑和其他組合物，能有小產(chǎn)生抗菌、抗氧化和/或抗炎效果。中國專利CN102058570A公開了一種鼠尾草酸在制備抑制血管生成藥物中的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)鼠尾草酸可有效抑制協(xié)管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和小體形成，具有抗血管生成作用。但是關(guān)于鼠尾草酸在預(yù)防或治療腦梗塞中的應(yīng)用目前還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種鼠尾草酸及其在藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防或治療腦梗塞藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是鼠尾草酸及其在藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防或治療腦梗塞藥物中的應(yīng)用。所述的鼠尾草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽作為單一成分或與其他藥學(xué)上可接受的 成分構(gòu)成組合物以制備預(yù)防或治療腦梗塞的藥物。所述的其他藥學(xué)上可接受的成分可以是與鼠尾草酸沒有拮抗作用的藥物，也可以是藥學(xué)上允許的任意一種或多種輔料。所述的藥物劑型為膠囊、片劑、丸劑、口服制劑、微囊制劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、
軟膏劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。所述的藥物給藥方式為注射、口服、胃腸外、吸入式噴霧或透皮給藥。所述的腦梗塞是腦缺血所導(dǎo)致的，其中所述的腦缺血為腦動脈粥樣硬化，血管內(nèi)膜損傷使腦動脈管腔狹窄，進(jìn)而使局部血栓形成導(dǎo)致的腦組織缺血。所述的鼠尾草酸的來源可以是經(jīng)純化的鼠尾草酸自身，或者不是處于經(jīng)純化的形式的鼠尾草酸，如含有鼠尾草酸的迷迭香提取物或其他植物提取物(如鼠尾草，Salviaspp.)O下面對本發(fā)明做進(jìn)一步的解釋和說明本發(fā)明化合物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用于此目的時(shí)，如果需要，可將本發(fā)明化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问?。本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔黏膜、皮膚、腹腔或直腸等。本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射和穴道注射等。給藥劑型可以是液體機(jī)型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如膠囊、片劑、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑、軟膏劑等。本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種
微粒給藥系統(tǒng)。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑和粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解齊U，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧こ烯山梨糖醇脂肪酸酷、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、こ基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酷、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、ニ氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鎂、硼酸、液體石蠟、聚こニ醇等。還可以將片劑進(jìn)ー步制成包衣片，例如糖衣包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
例如為了將給藥單元制成丸劑，例如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚こ烯吡咯烷酮、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃耆膠、こ醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、こ基纖維素
坐寸o例如為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分本發(fā)明化合物與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。例如，將本發(fā)明化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳剤、凍干粉針齊U，這種制劑可以是含水或非水的，可含ー種和/或多種藥效學(xué)上可以接受的載體、稀釋齊U、粘合劑、潤滑剤、防腐剤、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、こ醇、聚こニ醇、1，3-丙ニ醇、こ氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧こ烯山梨糖醇脂肪酸酷等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、PH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領(lǐng)域常用的。此外，如需要，也可向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其他材料。為達(dá)到藥用目的，增強(qiáng)療效，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明提供了一種鼠尾草酸及其在藥學(xué)上可接受的鹽的新用途，首次發(fā)現(xiàn)鼠尾草酸具有預(yù)防或治療腦梗塞作用，首次發(fā)現(xiàn)鼠尾草酸具有抗腦缺血再灌注損傷作用，說明鼠尾草酸可作為治療腦卒中的藥物使用，能夠應(yīng)用于腦梗塞藥物的制備以治療由于腦動脈粥樣硬化，血管內(nèi)膜損傷使腦動脈管腔狹窄，進(jìn)而因多種因素使局部血栓形成，使動脈狹窄加重或完全閉塞，導(dǎo)致腦組織缺血、缺氧、壞死，引起神經(jīng)功能障礙的相關(guān)性疾病。


圖I是鼠尾草酸對大鼠腦缺血再灌注誘導(dǎo)腦梗死的影響的照片，其中Sham :假手術(shù)組；Model :腦缺血再灌注損傷模型組；PD :陽性藥物尼莫地平組；CaA_L :鼠尾草酸低劑量組；CaA-M :鼠尾草酸中劑量組；CaA-H :鼠尾草酸高劑量組。
具體實(shí)施例方式下面通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)ー步說明本發(fā)明。實(shí)施例I :鼠尾草酸對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用I.實(shí)驗(yàn)材料和方法
I. I試劑和藥品鼠尾草酸凍干粉，由XXX提供，純度99. 0%。尼莫地平注射液，拜耳先靈醫(yī)藥保健股份公司生產(chǎn)，規(guī)格50ml: IOmg/瓶批號BXF15wl。I. 2試驗(yàn)動物雄性Wistar大鼠，體重300_350g，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司，生產(chǎn)許可證號SCXK (湘)2009-0004。I. 3局部腦缺血模型(MCAO)建立雄性Wistar大鼠，體重300_350g，采用可逆性大腦中動脈線栓塞法制成局灶性腦缺血再灌注模型(MCAO)。以10%水合氯醛(350mg/kg)給大鼠腹腔注射麻酔，仰臥位，于頸部皮膚行正中縱行切開，正中切開頸部皮膚，分離ー側(cè)頸外動脈和頸內(nèi)動脈主干及分叉處結(jié)扎頸外動脈，用動脈夾夾閉頸總動脈和頸內(nèi)動脈的分叉處，然后在頸外動脈遠(yuǎn)端結(jié)扎處 附近剪一小口，取頭端呈鼓錘狀的單絲尼龍線，由頸外動脈經(jīng)頸內(nèi)動脈插入深度約18-20mm微遇阻カ時(shí)停止，此時(shí)尼龍線頭端已到達(dá)頸內(nèi)動脈分叉為大腦中動脈和大腦前動脈處。用縫合線系住栓塞線，確認(rèn)無出血后縫合皮膚。缺血2h時(shí)將單絲尼龍線拔出形成再灌注，再灌注24h。假手術(shù)組不插入單絲尼龍線，其他步驟同手術(shù)組。I. 4分組與給藥實(shí)驗(yàn)分為6組，每組8只假手術(shù)組、模型組、鼠尾草酸三個(gè)劑量組和陽性對照藥尼莫地平組，分別在插線后10min、12h和24h設(shè)下靜脈注射給予鼠尾草酸(10、20和40mg/kg)或尼莫地平(20mg/kg)。插線后26h (即再灌注24h)后，對動物進(jìn)行神經(jīng)功能學(xué)評分。評分結(jié)束后取腦組織進(jìn)行TTC染色，評估腦梗死面積，并檢測腦組織丙ニ醛(MDA)含量。I. 5神經(jīng)癥狀評分根據(jù)Zea Longa評分方法評定大鼠行為，滿分為5分，分?jǐn)?shù)越高，動物行為障礙越嚴(yán)重。0分活動正常I分不能完全伸展對側(cè)前肢，2分向?qū)?cè)行走，3分向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈或追尾狀，4分不能自主行走，意識喪失。I. 6大腦梗死面積的測定評分完畢后立即斷頭取腦，去除小腦及腦干，將大腦沿冠狀面切成2mm厚的腦片，于2% TTC溶液中染色，染色后獲得照片如圖I所示，然后用10%甲醛固定24h后，用圖像分析軟件計(jì)算梗死面積與全腦面積之比。 I. 7腦組織中MDA含量測定取部分缺血再灌注腦組織，稱量后按I : 10加入冰生理鹽水，勻漿機(jī)勻漿后制成10%組織勻漿，3000rpm離心lOmin，用生理鹽水稀釋上清液至I %組織勻漿。硫代巴比妥酸法檢測勻衆(zhòng)中MDA含量，以nmol/mg蛋白質(zhì)表示。I. 8 結(jié)果I. 8. I鼠尾草酸對大鼠腦缺血再灌注損傷神經(jīng)癥狀評分的影響大鼠缺血再灌注模型組神經(jīng)功能評分為2. 83±0. 98，而鼠尾草酸10、20和40mg/kg能濃度依賴性降低缺血再灌注損傷導(dǎo)致的神經(jīng)功能評分增加，其中20和40mg/kg組與模型組比較有顯著性差異(P < 0. 01)。I. 8. 2鼠尾草酸對大鼠腦缺血再灌注損傷梗死面積的影響大鼠缺血再灌注模型組梗死面積為22. 38±4. 55%，而鼠尾草酸10、20和40mg/kg能濃度依賴性降低缺血再灌注損傷導(dǎo)致的梗死面積增加，其中20和40mg/kg組與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)。I. 8. 3鼠尾草酸對大鼠腦缺血再灌注腦組織MDA含量的影響大鼠缺血再灌注模型組腦組織MDA含量為23. 3±5. 86nmol/mg pro,與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P < 0. 01)。鼠尾草酸10、20和40mg/kg能濃度依賴性降低缺血再灌注損傷導(dǎo)致的腦組織MDA含量增加(P < 0. 05或P < 0. 01)。2.討論·腦血管疾病目前已成為嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病之一?，F(xiàn)已明確，腦缺血后相當(dāng)部分的血管能自然再通或溶栓治療后血流恢復(fù)再通，當(dāng)供血恢復(fù)后，恢復(fù)的灌流終止了缺血損傷的過程，并至少使部分可逆的損傷組織的功能得到恢復(fù)。但血流恢復(fù)后導(dǎo)致部分受損的腦細(xì)胞繼續(xù)死亡，這種有害作用稱作“再灌注損傷”，其機(jī)制與自由基生成増加，導(dǎo)致組織過氧化有夫。在缺血性腦損傷中，經(jīng)常采用的動物模型有全腦和局灶性腦缺血模型。臨床上常見的是局部或區(qū)域性腦缺血，大腦中腦動脈閉塞(MCAO)造成的動物模型類似臨床腦卒中情況。研究已表明，大鼠大腦中動脈閉塞后在急性期腦梗塞范圍最大，同時(shí)，大鼠神經(jīng)行為缺失癥狀嚴(yán)重。鼠尾草酸(Carnosic acid)是ー種從唇形科迷迭香屬植物迷迭香中提取的多酚類雙萜化合物，目前從其他多種植物中也提取出該物質(zhì)。鼠尾草酸作為一種適用于脂溶性成分的天然抗氧化物質(zhì)，能清除DPPH自由基，切斷類脂自動氧化的連鎖反應(yīng)，抑制過氧化物酶的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)紅細(xì)胞免于氧化溶血，目前主要用于食品添加剤、化妝品和保健食品的抗衰老成分。然而，近年的研究發(fā)現(xiàn)，鼠尾草酸具有廣泛的藥理及生物學(xué)活性，具有調(diào)節(jié)血脂、防止染色體畸變、抑制多種腫瘤及逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥、提高促白血病細(xì)胞分化藥物的療效等作用，但尚無對對腦卒中的研究報(bào)道。本試驗(yàn)顯示，鼠尾草酸能顯著降低大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí)神經(jīng)功能評分和梗死面積的增加，同時(shí)降低腦組織脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的含量，提示鼠尾草酸具有抗腦缺血再灌注損傷作用，其機(jī)制與抑制脂質(zhì)過氧化有夫，是ー個(gè)新的治療腦卒中的候選化合物。實(shí)施例2 :藥劑的制備鼠尾草酸50g以1，2_丙ニ醇IOOOml溶解，過濾后分裝于1000支安瓶中，每Iml含鼠尾草酸50mg。實(shí)施例3 :藥劑的制備鼠尾草酸100g，藥用淀粉適量，兩者充分混合，裝膠囊，制成1000粒膠囊，每粒重
0.25g,含鼠尾草酸lOOmg。實(shí)施例4 :藥劑的制備鼠尾草酸100g，乳糖150g，甘露醇100g，交聯(lián)聚こ烯吡咯烷酮35g，95 %こ醇適量，硬脂酸鎂3g，制成1000片片劑，每片重0. 4g，含鼠尾草酸100mg。
權(quán)利要求
1.鼠尾草酸及其在藥學(xué)上可接受的鹽或與其他藥學(xué)上可接受的成分構(gòu)成組合物在制備預(yù)防或治療腦梗塞的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述的鼠尾草酸來源是經(jīng)純化的鼠尾草酸自身，或者含有鼠尾草酸的迷迭香提取物或其他植物提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物劑型為膠囊、片劑、丸劑、口服制劑、微囊制劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、軟膏劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物給藥方式為注射、口服、胃腸外、吸入式噴霧或透皮給藥。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腦梗塞是腦缺血所導(dǎo)致的。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腦缺血為腦動脈粥樣硬化，血管內(nèi)膜損傷使腦動脈管腔狹窄，進(jìn)而使局部血栓形成導(dǎo)致的腦組織缺血。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鼠尾草酸及其在藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防或治療腦梗塞藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明提供了鼠尾草酸新的用途，首次發(fā)現(xiàn)鼠尾草酸具有預(yù)防或治療腦梗塞作用，首次發(fā)現(xiàn)鼠尾草酸具有抗腦缺血再灌注損傷作用，說明鼠尾草酸可作為治療腦卒中的藥物使用，能夠應(yīng)用于腦梗塞藥物的制備以治療由于腦動脈粥樣硬化，血管內(nèi)膜損傷使腦動脈管腔狹窄，進(jìn)而因多種因素使局部血栓形成，使動脈狹窄加重或完全閉塞，導(dǎo)致腦組織缺血、缺氧、壞死，引起神經(jīng)功能障礙的相關(guān)性疾病。
文檔編號A61K31/192GK102861003SQ201110187119
公開日2013年1月9日 申請日期2011年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月5日
發(fā)明者周應(yīng)軍, 姜德建 申請人:周應(yīng)軍, 姜德建