專(zhuān)利名稱(chēng)：用于到達(dá)派亞氏淋巴結(jié)的口服生物活性劑的制法和配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明有關(guān)口服生物活性劑的制法和配方。生物活性劑是在一種或多種可生物降解和生物相容的聚合物或共聚物賦形劑中被膠囊化。這種膠囊可使活性劑在不受影響下到達(dá)毛囊狀的淋巴結(jié)亦即動(dòng)物的派亞氏淋巴結(jié)且被此淋巴結(jié)所吸收。
利用微膠囊化防止敏感的生物活性劑降解已經(jīng)眾所周知。典型地，生物活性劑是在一種保護(hù)膜的物料里被膠囊化。這物料的種類(lèi)通常是聚合物。膠囊化生物活性劑的方法可以是在活性劑外包上一單層的聚合物物料，或是將活性劑均勻地分散入一聚合物的模型中。微膠囊中的活性劑劑量可以依所需加以改變，范圍可從微量到占95%微膠囊的成份。微膠囊的直徑也可依所需加以改變，范圍由小于1微米至大到3毫米或更多。
派亞氏淋巴結(jié)是淋巴小結(jié)的聚形體。它位于回腸或腸子下半部，是身體防衛(wèi)外來(lái)細(xì)菌感染的重要部位?？乖谴龠M(jìn)抗體形成的物質(zhì)，它包含外來(lái)蛋白質(zhì)或組織。所有抗體屬于免疫球蛋白這類(lèi)。當(dāng)一個(gè)抗體和抗原結(jié)合時(shí)，他們會(huì)變成一種無(wú)活性的復(fù)合物，因此中和了抗原。
派亞氏淋巴結(jié)擁有免疫球蛋白A前體B細(xì)胞。這些細(xì)胞殖生于胃腸道的固有層區(qū)和上呼吸道，并且能分化已成熟的免疫球蛋白A合成性血漿細(xì)胞。這些血漿細(xì)胞有效地分泌抗體分子。Heremans和Bazin的研究中，測(cè)量口服抗原老鼠體內(nèi)免疫球蛋白A的滋長(zhǎng)，結(jié)果顯示有一系列的獨(dú)特抗原免疫球蛋白A血漿細(xì)胞出現(xiàn)。剛開(kāi)始時(shí)出現(xiàn)在腸系膜的淋巴小結(jié)，接著出現(xiàn)在腺，最后出現(xiàn)在胃腸道的固有層區(qū)域。(Bazin，H.，Levi，G.，和Doria，G.，免疫球蛋白A形成抗體細(xì)胞對(duì)于免疫反應(yīng)的主要作用，此免疫反應(yīng)是在口服接觸抗原無(wú)菌老鼠的外胃腸淋巴組織中測(cè)定。J.Immunol.105∶1049∶1970和Crabbe，P.A.，Nash，D.R.，Bazin，H.Eyssen，H.，和Heremans，J.F.口服免疫或用鐵蛋白非經(jīng)腸免疫法的無(wú)菌老鼠的腸血漿細(xì)胞內(nèi)的免疫球蛋白A抗體。J.Exp.Med.130∶723;1969)。因此派亞氏淋巴結(jié)很明顯的是前體免疫球蛋白A細(xì)胞的來(lái)源，而它在受了抗原體敏感刺激下，沿著迂回移動(dòng)通道，釋放的免疫球蛋白A在遠(yuǎn)距離的粘膜表面出現(xiàn)。這種迂回方式提供一常見(jiàn)粘膜免疫系統(tǒng)，即通過(guò)持續(xù)運(yùn)送受敏感化的B細(xì)胞到粘膜區(qū)域，以反應(yīng)腸子附近區(qū)域的抗原和潛在的病原。
本發(fā)明的特殊重要性是在于有以口服免疫法誘導(dǎo)保護(hù)性抗體的能力。動(dòng)物將抗原消化，導(dǎo)致獨(dú)特抗原sIgA抗體出現(xiàn)在支氣管或鼻液中已是眾所周知。例如，在用人類(lèi)作實(shí)驗(yàn)的研究顯示，口服流行性感冒疫苗的效力是在鼻分泌物中誘導(dǎo)分泌抗流行性感冒抗體。
明顯地，涉及口服性活劑的任何方法或配方，都有保護(hù)活性劑在通過(guò)胃腸道時(shí)避免降解的設(shè)計(jì)。如果沒(méi)有經(jīng)過(guò)特殊設(shè)計(jì)，口服劑會(huì)以不恰當(dāng)?shù)牧炕蚴У那闆r下到達(dá)派亞比淋巴結(jié)。在沒(méi)受到保護(hù)的形式下，大量的生物活性劑必須先被消化成一特定有效量才能到達(dá)派亞氏淋巴結(jié)，結(jié)果是一大部分的活性劑不能被吸收。并且，為了增加運(yùn)送活性劑到派亞氏淋巴結(jié)，多次數(shù)的口服是必須的。像這種多次數(shù)口服高劑量活性劑是既浪費(fèi)又不方便。
因此，有必要找出一口服疫苗，能夠有效地刺激粘膜的免疫系統(tǒng)，且能克服生物活性劑在穿過(guò)胃腸道到達(dá)派亞氏淋巴結(jié)時(shí)降解的問(wèn)題。更特別的需要是找出一方法即運(yùn)送不會(huì)降解的抗體到達(dá)派亞氏淋巴結(jié)。
本發(fā)明是有關(guān)利用口服方式運(yùn)送生物活性劑到動(dòng)物的派亞氏淋巴結(jié)的方法和配方。生物活性劑在可生物降解的和生物相容的聚合物或共聚物中被膠囊化。膠囊可使生物活性劑在沒(méi)降解或僅受少量降解的情況下通過(guò)胃腸道，使活性劑在到達(dá)派亞氏淋巴結(jié)時(shí)沒(méi)受到改變且還保持有效量。術(shù)語(yǔ)生物相容的定義是一種聚合物料不會(huì)毒害身體，不會(huì)致癌且不會(huì)誘發(fā)身體組織發(fā)炎，該物料應(yīng)該是可生物降解的意思是，能被生理上的過(guò)程降解成能被身體輕易清理掉的物質(zhì)，并且不會(huì)累積在身體中。本微膠囊同時(shí)也具有可被派亞氏淋巴結(jié)選擇性吸收的大小。因此，如何讓生物活性劑到達(dá)派亞氏淋巴結(jié)且被其吸收的問(wèn)題解決了。
本發(fā)明的目的是提供一種動(dòng)物口服生物活性劑的方法，使生物活性劑能到達(dá)派亞氏淋巴結(jié)且被其吸收?；钚詣┠茉诓皇バ芟峦ㄟ^(guò)動(dòng)物胃腸道，刺激粘膜免疫系統(tǒng)。
本發(fā)明更進(jìn)一步的目的是提供一個(gè)配方，包括生物活性劑的中心部份和一種具可生物降解及生物相容特性的并且膠囊化于共聚物或共聚物賦形劑，以及它們能如上所述以口服方式應(yīng)用。
解說(shuō)執(zhí)行本發(fā)明實(shí)施例方法。也就是指，延長(zhǎng)對(duì)老鼠運(yùn)送膠囊化在50∶50聚(DL-丙交酯共乙交酯)中的抗原trinitrophenylkeyholelimpethemocyanin。
但是必須注意的是除了聚(DL-丙交酯共乙交酯之外，其他聚合物也可用。以下舉例但不限于此，如聚乙醇酸，DL-丙交酯和乙交酯混合的共聚物，共聚草酸鹽，聚已內(nèi)酯，聚(丙交酯共乙內(nèi)酯，聚酯酰胺，聚原酸酯及聚β-羥基丁酸。
還有，其他生物活性劑也可采用。以下舉例但不限于所舉抗原，如接種抗濾過(guò)性病毒的抗原，細(xì)菌抗原，原蟲(chóng)抗原，真菌疾病如流行性感冒旁系病毒的抗原，嗜血桿菌屬抗原，球桿菌百日咳抗原，奈瑟氏球菌屬抗原，淋病抗原，肺炎鏈球菌抗原，鐮狀瘧蟲(chóng)抗原或致病微生物誘發(fā)疾病的抗原，或接種對(duì)抗由微生物如驅(qū)蟲(chóng)病原所引發(fā)疾病的抗體。
Ⅰ.顯微膠囊(a)為派亞氏淋巴結(jié)穿透研究制備染色裝填微膠囊香豆素，一非水溶性染料與聚苯乙烯及一種非生物降解聚合物一起微膠囊化。目的是提供可以用來(lái)跟隨微膠囊穿透入派亞氏淋巴結(jié)的彩色微膠囊。制備此微膠囊的方法如下第一，制備一種聚合物溶液，方法是將4.95克的聚苯乙烯(型號(hào)685d，DowChemicalCompang，MildandMI)溶解在29.5克二氯甲烷(ReagentGrade，EastmanKodak.，RochesterNY)。然后將0.05克的香豆素(Polysclences，Inc.，Warrington，PA)加進(jìn)調(diào)好的聚合物溶液中，并且用一支有磁性的攪拌棒攪拌使香豆素溶解。
在另一溶器里，準(zhǔn)備10%(重量)的poly(vinylalcohol)聚(乙烯醇(PVA))水溶液。制備此加工介質(zhì)的方法是將40克的PVA(VINOL205c，AirProductsandChemicals，Allenton，PA)溶解入360克的去離子水中。在制備好的PVA溶液中，加進(jìn)6克二氯甲烷溶液飽和。接著將PVA溶液倒入一個(gè)裝備有一支truebore攪拌軸和一個(gè)2.5英寸trflon渦輪推進(jìn)器的1-L樹(shù)脂鍋(AceGlass，Irc.，Vineland，NJ)再用-Fisherstedi速度馬達(dá)以每分鐘380轉(zhuǎn)數(shù)攪拌。
然后，將聚苯乙烯/香豆素混合物加入含有PVA加工介質(zhì)的樹(shù)脂鍋。該方法是利用其7-mm內(nèi)徑長(zhǎng)頸漏斗來(lái)引導(dǎo)混合物進(jìn)入樹(shù)脂鍋。產(chǎn)生穩(wěn)定的油含于水中的乳狀劑，在大氣壓下攪拌約30分鐘以產(chǎn)生適當(dāng)大小的油微小滴。接著封閉樹(shù)脂鍋，用一個(gè)接有氣壓計(jì)和放水閥的水抽吸器將樹(shù)脂鍋內(nèi)壓逐漸減低到520mmHg。鍋內(nèi)物質(zhì)在減壓下攪拌約24小時(shí)，使所有二氯甲烷蒸發(fā)。在所有二氯甲烷蒸發(fā)后，用離心收集硬化的微膠囊，并且在室溫的真空室內(nèi)干燥72小時(shí)。
(B)制備帶有抗原的微膠囊將三硝基苯基-栓體洞 形血球(TNP-KLH)，水溶性抗原膠囊化在一種可生物相容的，生物溶解的聚酯物聚(DL-丙交酯共乙交酯)中。制備微膠囊的程序如下首先將0.5克的50∶50聚(DL-丙交酯共乙交酯)溶入4.0克的二氯甲烷中制備聚合物溶液。然后將300微升TNP-KLH以水溶液(46mgTNP-KLH/ml;在分解后)，均勻的分散入聚(DL-丙交酯共乙交酯)溶液中。分散期間必須用Vortex-Genie2(ScientificIndustries，Inc.，Bohemia，NY)旋轉(zhuǎn)混合物。
在另一容器中將4.8克PVA溶于55.2克去離子水中制備8%的PVA水溶液。PVA溶解后，將其加入一個(gè)100-mL樹(shù)脂鍋(KontesGlass，Inc.，Vineland，NJ)。此鍋備有一trubebore攪拌器和1.5英寸聚四氟乙烯渦輪旋轉(zhuǎn)混合器。將調(diào)好的聚合物溶液經(jīng)由-7-mm內(nèi)徑漏斗倒入含PVA配制介質(zhì)的樹(shù)脂鍋中。倒入過(guò)程中，須以每分鐘650旋轉(zhuǎn)攪拌PVA溶液。在攪拌鍋中形成的油含于水中乳狀劑約10分鐘后，將樹(shù)脂鍋中的物質(zhì)移轉(zhuǎn)到其中裝有3.5L去離子水的4-L燒杯。再用一支2-英寸不銹鋼旋轉(zhuǎn)混合器以每分鐘800旋轉(zhuǎn)數(shù)攪拌，攪拌去離子水中形成的微膠囊約30分鐘，離心收集，再用去離子水沖洗2次以除去任何殘余的PVA，再用冷凍干燥法收集。該微膠囊是由直徑大小約1到10微米的球狀微粒組成。
測(cè)定帶有抗原微膠囊中TNP-KLH成份(即微膠囊內(nèi)裝填料)的方法如下在12-mL離心管內(nèi)秤出10mg帶有抗原的微膠囊。加3.0mL二氯甲烷到管內(nèi)，并旋渦動(dòng)以溶解聚(DL-丙交酯共乙交酯，然后再加3.0mL去離子水到管內(nèi)并且劇烈地旋渦動(dòng)1分鐘，離心分離離心管中的成份，分出有機(jī)層和水層。
將水層轉(zhuǎn)移到-10-mL容積定量燒瓶，再將去離子水加入燒瓶直到記號(hào)處。TNP-KLH在燒瓶中的數(shù)量和TNP-KLH在微膠囊內(nèi)的數(shù)量，可用蛋白質(zhì)檢定算出。依照重量計(jì)算，微膠囊含有0.2%TNP-KLH。
Ⅱ.生物性研究
(A)老鼠BALB/C老鼠，8到12周大，采用于本研究中。
(B)Trinitrophenyl-KeyholeLimpetHemocyanin血藍(lán)蛋白來(lái)自Keyhole Limpet(KLH)Megathura Crenulata是采購(gòu)于Calbio chem(San Diego，CA)。依照Rittenburg和Amkraut的程序(Rittenburg，M.B.和Amkraut，A.A.trinitrophenyl-hemocyanin，三硝基苯基-血藍(lán)蛋白的免疫性生產(chǎn)初級(jí)和次級(jí)抗半抗原沉淀素J.Immunol.97∶421;1966)。置換率是分光光度測(cè)定為T(mén)NPB61-KLH，這是在350nm波長(zhǎng)下使用15400莫耳消光系數(shù)，并對(duì)在這波長(zhǎng)下的KLH釋放采用30%校正(Rittenburg，M.B.和Amkraut，A.A.三硝基苯基-血藍(lán)蛋白的免疫性生產(chǎn)初級(jí)和次級(jí)抗半抗原沉淀素J.Immunol.97∶421;1966)。
(C)免疫微膠囊和非微膠囊TNP-KLH以10μg/mL抗原濃度懸浮在8份過(guò)濾滅菌的自來(lái)水和2份碳酸氫鈉(7.5%溶液)。先將受試的老鼠禁食一整夜，再以插管針經(jīng)由胃部插管法灌入0.5mL的混懸液(Babb，J.L.，Kiyono，H.，Michalek，S.M.和McGhee，J.R.LPS免疫反應(yīng)規(guī)則抑制口服T-dependant抗原的免疫反應(yīng)，J.Immunol.127∶1052;1981)。
(D)生物液的收集1.血清在穿刺后眼眶叢，以核校用的毛細(xì)吸量管收集血液。血塊形成后，集中血清并用離心機(jī)除去紅血球和血小板，用熱使失去活力，并保存在-70℃直到檢定時(shí)。
2.腸分泌物在每15分鐘的間隔將老鼠灌上4滴(0.5mL)灌洗液(25mM氯化鈉，40mM硫酸鈉，10mM氯化鉀，20mM碳酸氫鈉和48.5mM聚乙烯乙二醇，530mosM滲透性)(Elson，C.O.，Ealding，W.andLefkowitz，J.一種灌洗技術(shù)允許在老鼠腸分泌物中重覆測(cè)量免疫球蛋白A抗體J.Immunol.Meth.67∶101;1984)。在灌入最后一滴灌洗液的15分鐘后，老鼠已被麻醉。再過(guò)15分鐘用肌肉注射0.1mg毛果蕓香素。注射后10到20分鐘，刺激腸內(nèi)含物排泄。將此排泄物收集在裝有3mL溶液的陪替氏皿中，該皿中含有0.1mg/mL大豆胰蛋白酶抑制劑(Sigma，stLouis，MO)在50mMEDTA的溶液。劇烈地旋轉(zhuǎn)陪替氏皿離心分離移出懸浮物，將懸浮物轉(zhuǎn)移到一圓底的聚碳酸離心管中。在采用高速離心沉淀作澄清作用以前，必須加入30μL苯甲基磺酰氟化物(PMSF，Sigma)。澄清后，再加進(jìn)20μL苯甲基磺酰氟化物和20μL1%疊氮鈉，使在胎兒小牛血清(FCS)中形成10%溶液以提供對(duì)任何維持蛋白質(zhì)酶的替代物。
3.唾液與腸排泄物的同時(shí)有大量的唾液分泌。用毛細(xì)管作用將0.25mL唾液收集到巴斯德吸管，在澄清以前必須加入大豆胰蛋白酶抑制劑，苯甲基磺酰氟化物，疊氮化鈉和FCS，每種各20μL。
(E)化學(xué)免疫試劑特別為鼠的IgM，IgG和IgAo用商業(yè)獲得的固態(tài)吸收和親合純化的polyclonalgoatIgG抗體，(SouthernBiotechnologyAssociates，Birmingham，AL)。根據(jù)他們恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)合單克隆抗體和骨髓細(xì)胞瘤蛋白質(zhì)的能力，可測(cè)出他們?cè)诜派涿庖邷y(cè)定的獨(dú)特性。
(F)固相放射免疫測(cè)定使用氯胺T方法將純化抗體標(biāo)上不含載體的Na125I(Amersham)。(Hunter，W.M.放射性免疫測(cè)定In∶Handbook of experimental Immunology，M.Weir(編者)。Blackwell Scientific Publishing，Oxford.p.14.1;1978)。在Immulon Removawell測(cè)定條上(Dynatech)涂TNP(三硝基苯)，此三硝基苯與牛血清蛋白(BSA)在BBS中過(guò)液在4℃下以每mL/μg比例結(jié)合。對(duì)照條不涂上任何東西，但所有條子都在BBS中用1%BSA在室溫下隔離2小時(shí)。BSA是用來(lái)作所有樣本和標(biāo)記125I試劑的稀釋劑。將生物樣品液稀釋到含有1至1000ng/mL異型獨(dú)特抗原的抗體，再將生物液樣本加入3次往返洗過(guò)的管中，然后在室溫下培養(yǎng)6小時(shí)，洗后將1，000，000cpm標(biāo)記125I獨(dú)特異型的抗免疫球蛋白加入每個(gè)管中，并且在4℃中培養(yǎng)過(guò)夜。水洗除去未結(jié)合的125I抗體后，管在γ-5500的分光計(jì)中計(jì)數(shù)(Beckman Instruments，Inc.，San Ramon，CA)。使用二倍系烈稀釋標(biāo)準(zhǔn)血清(Miles Sciantific，Naperville，IL)放在覆有1μg/管獨(dú)特異型抗體的管上進(jìn)行校準(zhǔn)。此標(biāo)準(zhǔn)血清含有已知免疫球蛋白數(shù)量。校準(zhǔn)曲線和未知的補(bǔ)入是通過(guò)電腦獲得，電腦程序是采用“Logit-log”或“Four Parameter Logistic”BASIC程序(RIA001及RIA004)。本程序在Biomedical ComputingTechnology Center中有(Vanderbilt Medical Center，Nashville，TN)。
(G)結(jié)果1.制備的染色裝填微膠囊穿入派亞氏淋巴結(jié)調(diào)查微膠囊進(jìn)入與腸有關(guān)的淋巴網(wǎng)狀組織的數(shù)量和穿透時(shí)受到的大小限制，是讓老鼠口服帶有螢光染料香豆素的聚苯乙烯微膠囊。在沒(méi)有麻醉且斷過(guò)食的BALB/C老鼠，用一喂食針，送進(jìn)0.5mL的100mg/mL混懸液入老鼠胃中。此混懸液是各式各樣大小的螢光膠囊(直徑小于5μm或8到50μm)泡在自來(lái)水中制成。老鼠在服用的不同時(shí)間(0.5，1和2小時(shí)后)會(huì)死掉，然后將小腸切除并分離出1公分含有分散好派亞氏淋巴結(jié)的腸子。沖洗腔管部分，翻出并且快速冷凍。
制備冷凍部份，用螢光顯微鏡查驗(yàn)由腸腔管吸收入派亞氏淋巴結(jié)的微膠囊數(shù)目，地點(diǎn)和大小。雖然微膠囊?jiàn)A陷在絨毛中，避免了膠囊被沖洗掉，除了派亞氏淋巴結(jié)外在任何點(diǎn)都沒(méi)有看見(jiàn)有穿入組織的現(xiàn)象。在口服半小時(shí)后，觀察到微膠囊在近側(cè)的派亞氏淋巴結(jié)，而非遠(yuǎn)側(cè)。當(dāng)時(shí)間加長(zhǎng)，微膠囊會(huì)被蠕動(dòng)動(dòng)作運(yùn)送，2小時(shí)內(nèi)他們通過(guò)胃腸道，并出現(xiàn)在回腸的派亞氏淋巴結(jié)。微膠囊主要是周邊式的存在。遠(yuǎn)離派亞氏淋巴結(jié)圓頂中心。這種情形給人一種印象，就是蠕動(dòng)時(shí)夾陷在圓頂和鄰近毛絨幫助了膠囊被吸收。雖然在派亞氏淋巴結(jié)中看到了一些直徑達(dá)到10μm的粒子，被吸收最多的還是直徑小于5μm的微膠囊，而且在查驗(yàn)的期間中，它們還是所發(fā)現(xiàn)最深入派亞氏淋巴結(jié)的膠囊。本結(jié)果說(shuō)明，直徑在1到5μm的微膠囊被快速地且選擇性地由腸腔管吸收入派亞氏淋巴結(jié)。這建議由生物降解膜物質(zhì)組成的微膠囊可當(dāng)作是一個(gè)有效方法以運(yùn)送抗原到腸有關(guān)的淋巴組織誘發(fā)粘膜表面的免疫性。
2.用帶抗原可生物降解微膠囊作口服疫苗用聚(DL-丙交酯共乙交酯)共聚物作外圍物料來(lái)制造含有半抗原蛋白質(zhì)抗原(TNP-KLH)。依大小分開(kāi)微膠囊并將直徑在1到5μm范圍內(nèi)的膠囊選出來(lái)作評(píng)估。這些顯微膠囊依重量計(jì)含有0.2%抗原。膠囊在被消化時(shí)能成為有效抗原運(yùn)送系統(tǒng)，其方式是將0.5mL的10mg/mL混懸液(10μg抗原)在碳酸氫鈉緩沖的無(wú)菌自來(lái)水中經(jīng)胃培養(yǎng)4天。為了作比較，另一組老鼠也同樣的采用口服免疫方法服進(jìn)0.5mL沒(méi)有膠囊的TNP-KLH溶液(20μg/mL)。對(duì)照組老鼠群只口服稀釋物。
在最后一次免疫的第14天和第28天，血清，唾液和腸分泌物從每一組斷食的5只老鼠獲得。這些樣品用獨(dú)特異型放射免疫檢定法來(lái)測(cè)定獨(dú)特TNP的級(jí)數(shù)和所有免疫球蛋白M，免疫球蛋白G和免疫球蛋白A的異型抗原的抗體(見(jiàn)表1)。唾液和腸分泌物樣品含有抗原幾乎都是免疫球蛋白A級(jí)。本結(jié)果與過(guò)去研究一致且提供證據(jù)，證明用來(lái)收集分泌液的程序中沒(méi)有造成血清的污染。沒(méi)有任何一種免疫紀(jì)錄導(dǎo)致所有各級(jí)免疫球蛋白在目前所測(cè)試液體中有明顯改變。微量但可測(cè)出的自然發(fā)生IgM和IgG異構(gòu)型抗-TNP抗體，被偵測(cè)到存在血清中，血清中的IgA異構(gòu)型，和受免疫對(duì)照組老鼠的腸分泌物中。然而使用相同劑量的30μg微膠囊化TNP-KLH連續(xù)超過(guò)3天會(huì)造成獨(dú)特抗原IgA抗體出現(xiàn)在對(duì)照組老鼠的分泌物和血清中所有的異構(gòu)型在免疫后的第14天(看表一中最后一欄)。在免疫后第28天抗體會(huì)增加更高。相反的口服相同數(shù)量無(wú)膠囊化抗原，在任何種測(cè)驗(yàn)過(guò)的液體中，不具有誘導(dǎo)任何異型獨(dú)特抗體效力。
(H)顯著性本研究結(jié)果在幾方面值得注意。第一，顯著的獨(dú)特抗原IgA抗體被誘發(fā)出現(xiàn)在血清和粘膜分泌物中。這種反應(yīng)在一般使用的免疫法中少見(jiàn)或根本沒(méi)有。因此本免疫方法會(huì)促使免疫性顯著的強(qiáng)化在粘膜，肛門(mén)入口處或在針對(duì)一些細(xì)菌和病毒病原的病理區(qū)。第二，微膠囊化抗原的制備是一種在口服時(shí)有效的免疫原;相反地當(dāng)口服相同數(shù)量無(wú)膠囊抗原體，則缺乏有效免疫原。因此，微膠囊會(huì)驚人的增進(jìn)效用，這點(diǎn)可由派亞氏淋巴結(jié)增加吸收的量來(lái)推定。第三，免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)期似乎是耐久的。當(dāng)在沒(méi)有賦形劑時(shí)，蛋白質(zhì)抗原系統(tǒng)免疫法的特征是在7天到14天內(nèi)是抗體頂峰;而口服含抗原微膠囊，第28天所誘發(fā)的反應(yīng)高于第14天。這說(shuō)明壁膜物料的生物腐蝕和抗原釋放發(fā)生于延長(zhǎng)期間內(nèi)，也因此誘發(fā)更耐久的反應(yīng)。

權(quán)利要求
1.一種組合物在制備一種藥物中的應(yīng)用，所述組合物包含直徑為10μm或更小的微膠囊，該微膠囊在可生物降解的生物相容性賦形劑中含有有效量的生物活性成分，所述藥物供動(dòng)物口服且能夠?qū)⑸锘钚詣┽尫胖了鰟?dòng)物的派亞氏淋巴結(jié)，其中所述微膠囊能夠被派亞氏淋巴結(jié)選擇性吸收且能夠通過(guò)胃腸道而不受降解。
2.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述直徑是5μm或更小。
3.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述賦形劑是聚合物。
4.按權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中所述賦形劑是共聚合物。
5.按權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述賦形劑選自聚乙醇酸、DL-丙交酯和乙交酯混合共聚物、共聚草酸酯、聚已內(nèi)酯、聚(丙交酯-共-已內(nèi)酯)、聚酰胺酯、聚原酸酯及聚β-羥基丁酸。
6.按權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中所述共聚物賦形劑是聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)。
7.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述生物活性劑至少一個(gè)是原生動(dòng)物抗原、病毒抗原、真菌抗原或細(xì)菌抗原。
8.按權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中所述抗原是三硝基苯基鑰孔 血藍(lán)蛋白。
9.按權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其中所述微膠囊的直徑介于1至5μm之間，所述生物活性劑是三硝基苯基鑰孔 血藍(lán)蛋白，所述賦形劑是50∶50聚(DL-丙交酯共乙交酯)。
10.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述直徑為約1μm至10μm。
11.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述直徑為約1μm至5μm。
全文摘要
本發(fā)明有關(guān)口服生物活性劑的方法和配方，這生物活性劑包括將活性劑在一種或多種可生物降解和生物相容的聚合物或共聚物賦形劑中膠囊化以形成微膠囊。這種微膠囊能夠不受影響的通過(guò)胃腸道且被派亞氏淋巴結(jié)所吸收。
文檔編號(hào)A61K39/00GK1111157SQ9510089
公開(kāi)日1995年11月8日 申請(qǐng)日期1995年3月8日 優(yōu)先權(quán)日1986年10月24日
發(fā)明者T·R·泰斯, J·K·斯泰斯, R·M·吉利, J·H·埃爾德里奇 申請(qǐng)人:南方研究所, Uab研究基金會(huì)