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冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法
專利名稱：冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法，尤其是冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法，適用于預(yù)防人體甲型肝炎的減毒活疫苗及制備的場合。
病毒性肝炎是我國最主要的傳染病，而甲型肝炎占已知六種病毒性肝炎發(fā)病率的首位。自1992年以來，全國已有近一億人接種液體劑型的甲型肝炎減毒活疫苗，獲得了非常滿意的流行病學(xué)保護(hù)效果。甲肝的年發(fā)病率平均每年以20％左右的速度下降。但是，由于我國處于發(fā)展中國家，許多邊遠(yuǎn)地區(qū)交通仍然不便，而一般的液體劑型甲型肝炎減毒活疫苗在4-8℃條件保存有效期只有3個月。含有穩(wěn)定劑的液體劑型甲型肝炎減毒活疫苗在4-8℃條件保存有效期也僅有6個月。到目前為止，國外尚未有大規(guī)模應(yīng)用于人體的甲型肝炎減毒活疫苗以及凍干劑型的甲型肝炎減毒活度苗。而國內(nèi)含有疫苗保護(hù)劑的使用真空冷凍干燥方法制造而成的、4-8℃保存有效期達(dá)18個月的凍干甲型肝炎減毒活疫苗至今未有報告。
根據(jù)我國國情，為控制甲型肝炎的流行，接種甲型肝炎減毒活疫苗是一種行之有效的方法。因此，須使廣大的人群，特別是農(nóng)村人群都能接種到安全的、免疫原性強(qiáng)的、高效的甲型肝炎減毒活疫苗。
本發(fā)明的目的就在于提供一種安全、高效、穩(wěn)定性好、有效期長的甲型肝炎減毒活疫苗新劑型-即含有冷凍干燥保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法。
本發(fā)明的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗，疫苗中包含有明膠、乳糖、硫酸鎂、氯化鎂組成的甲型肝炎病毒冷凍干燥保護(hù)劑和基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液。
甲型肝炎病毒冷凍干燥保護(hù)劑組成為明膠，疫苗中終濃度為0.1-0.5克％，乳糖，疫苗中終濃度為3.0-6.5克％，硫酸鎂，疫苗中終濃度為0.1-0.25克％，氯化鎂，疫苗中終濃度為0.3-0.45克％。
基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液為可耐高溫滅菌的基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液。
基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液的PH值為7.0-7.4。
冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的制備方法。每100毫升去離子蒸餾水中加入基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液0.94克。待溶解后加入明膠0.1-0.5克。將該溶液溫?zé)?、待明膠充分溶解后再加入乳糖3.0-6.5克，然后加入、用去離子蒸餾水溶解好的硫酸鎂0.1-0.25克和氯化鎂0.3-0.45克，過濾，分裝，蒸氣高壓滅菌。再將甲肝病毒濃縮液按每人份接種病毒量6.5-7.0log10TCID50比例加入到上述含有甲型肝炎減毒活疫苗冷凍干燥保護(hù)劑的基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液中進(jìn)行灌裝，采用真空冷凍干燥法，冷凍干燥箱預(yù)冷至-20℃-40℃疫苗進(jìn)箱，凍干箱擱板溫度為-35℃-50℃時，開真空、升華，二次干燥真空冷凍干燥箱擱板溫度為15℃-30℃，即制成冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。
本發(fā)明的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，工藝合理，安全性和穩(wěn)定性好，有效期長，通常4-8℃保存有效期可達(dá)18個月，預(yù)防甲肝效果好，具有重大社會經(jīng)濟(jì)效益和實(shí)施價值。
本發(fā)明的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法，其實(shí)施方案為疫苗中包含有明膠、乳糖、硫酸鎂、氯化鎂組成的甲型肝炎病毒冷凍干燥保護(hù)劑和基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液溶液。
甲型肝炎病毒冷凍干燥保護(hù)劑組成為明膠，疫苗中終濃度為0.1-0.5克％，乳糖，疫苗中終濃度為3.0-6.5克％，硫酸鎂，疫苗中終濃度為0.1-0.25克％，氯化鎂，疫苗中終濃度為0.3-0.45克％。
基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液為可耐高溫滅菌的基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液。
基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液的PE值為7.0-7.4。
冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的制備方法，每100毫升去離子蒸餾水中加入基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液0.94克，待溶解后加入明膠0.1-0.5克，將該溶液溫?zé)?，待明膠充分溶解后再加入乳糖3.0-6.5克，然后加入用去離子蒸餾水溶解好的硫酸鎂0.1-0.25克和氯化鎂0.3-0.45克，達(dá)濾，分裝，蒸氣高壓滅菌。再將甲肝病毒濃縮液按每人份接種病毒量6.5-7.0log10TCID50比例加入到上述含有甲型肝炎減毒活疫苗冷凍干燥劑的基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液中進(jìn)行灌裝，采用真空冷凍干爆法，冷凍干燥箱預(yù)冷至-20℃-40℃疫苗進(jìn)箱，凍干箱擱板溫度為-35℃-50℃時，開真空、升華，二次干燥真空冷凍干燥箱擱板溫度為15℃-30℃，即制成冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。
實(shí)施例1將含有疫苗凍干保護(hù)劑的甲型肝炎減毒活疫苗，按每人份分裝量0.5-1.2ml、內(nèi)含病毒量6.5-7.0log10TCID50，一部分加塞壓蓋4℃保存作為疫苗凍干前感染性滴度檢測用，另一部分疫苗將丁基膠并塞加至1/3處，再進(jìn)行冷凍干燥。五個不同批號含有疫苗凍干保護(hù)劑的甲肝減毒活疫苗經(jīng)冷凍干燥后，感染性滴度檢測證明按本發(fā)明權(quán)利要求1的方法冷凍干燥制成的凍干甲型肝炎減毒活疫苗，疫苗冷凍干燥后感染性滴度比冷凍干燥前僅下降在0.26-0.41log10TCID50/ml之同。(附表1)
表1甲肝減毒活疫苗凍干前后感染性滴度測定
實(shí)施例2同一批號的，含有明膠、乳糖、氯化鎂、硫酸鎂、基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MRM)平衡鹽溶液的甲肝減毒活疫苗凍干苗和未經(jīng)凍干的液體對照苗，存放在同一個4-8℃冰箱內(nèi)，定期隨機(jī)取樣測定疫苗感染性滴度，結(jié)果證明按本發(fā)明權(quán)利要求1方法冷凍干燥制成的凍干甲型肝炎減毒活疫苗，具有良好的穩(wěn)定性，在4-8℃條件下存放21個月，疫苗感染性滴度不變。而未經(jīng)冷凍干燥的液體對照苗在4-8℃存放21個月感染性滴度明顯下降，達(dá)到1.41log10TCID50/ml。本結(jié)果同時證明未經(jīng)冷凍干燥的液體對照苗在4-8℃條件下存放10個月的感染性滴度與凍干苗存放24個月的感染性滴度下降幅度相近。(附表2)表2凍干甲肝減毒活疫苗4-8℃保存感染性滴度測定
實(shí)施例3將含有明膠、乳糖、氯化鎂、硫酸鎂基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液凍干保護(hù)劑的甲肝減毒活疫苗和不含有明膠、乳糖、氯化鎂、硫酸鎂基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽保護(hù)劑，用PBS緩沖液稀釋的甲肝減毒活疫苗，在同一真空冷凍干燥條件下進(jìn)行冷凍干燥，然后隨機(jī)取樣測定疫苗感染性滴度。結(jié)果證明未加保護(hù)劑的疫苗經(jīng)冷凍干燥后，病毒活力大部分喪失。(附表3)
表3凍干保護(hù)劑對甲肝減毒活疫苗感染性滴度的影響
實(shí)施例4將含有冷凍干燥劑批號為96A2冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗，接種于79例甲型肝炎病毒抗體(抗HAV-lgG抗體)陰性的6-7歲小學(xué)一年級學(xué)生，接種方法為上臂皮下注射1.0ml，疫苗病毒含量為6.50log10TCID50/ml。冷凍干燥苗臨用前用滅菌注射用水溶解。疫苗接種8周后抽上臂靜脈血清抗甲型肝炎病毒抗體(抗HAV-lgG抗體)結(jié)果表明79例凍干苗接種者中有72例甲肝病毒抗體(抗HAV-lgG抗體)檢驗(yàn)呈陽性，抗體陽轉(zhuǎn)率為91.14％。
權(quán)利要求
1.冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗，其特征是疫苗中包含有明膠、乳糖、硫酸鎂、氯化鎂組成的甲型肝炎病毒冷凍干燥保護(hù)劑和基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征是甲型肝炎病毒冷凍干燥保護(hù)劑組成為明膠，疫苗中終濃度為0.1-0.5克％，乳糖，疫苗中終濃度為3.0-6.5克％，硫酸鎂，疫苗中終濃度為0.1-0.25克％，氯化鎂，疫苗中終濃度為0.3-0.45克％。
3.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征是基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液為可耐高溫滅菌的基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液。
4.如權(quán)利要求1或3所述的基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液，其特征是該平衡鹽溶液PH值為7.0-7.4。
5.如權(quán)利要求1所述的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的制備方法，其特征是100毫升去離子蒸餾水中加入基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽0. 94克，待溶解后加入明膠0.1-0.5克，將該溶液水溶溫?zé)?，待明膠充分溶解后再加入乳糖3.0-6.5克，然后加入用去離子蒸餾水溶解好的硫酸鎂0.1-0.25克和氯化鎂0.3-0.45克，再將甲肝病毒濃縮液按每人份接種病毒量6.5-7.0log10TCID50比例加入到上述含有甲型肝炎減毒活疫苗冷凍干燥劑的基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液中進(jìn)行灌裝，采用真空低溫冷凍干燥法，冷凍干燥箱預(yù)冷至-20℃-40℃疫苗進(jìn)箱，凍干箱擱板溫度為-35℃-50℃時，開真空、升華，二次干燥真空冷凍干燥箱擱板溫度為15℃-30℃，即制成冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。
全文摘要
一種冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法,其疫苗包含有明膠、乳糖、硫酸鎂、氯化鎂組成的甲型肝炎冷凍干燥保護(hù)劑和MEM氨基酸基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液溶液,將甲肝病毒液按一定比例加入到上述含有甲型肝炎病毒冷凍干燥劑的MEM氨基酸基礎(chǔ)氨基酸培養(yǎng)基(MEM)平衡鹽溶液溶液中,采用真空冷凍干燥,即制成冷凍干燥甲肝減毒活疫苗,工藝合理,安全性和穩(wěn)定性好,有效期長達(dá)18個月,預(yù)防甲肝效果好,具有重大社會經(jīng)濟(jì)效益和實(shí)施價值。
文檔編號A61K39/29GK1252308SQ9812377
公開日2000年5月10日 申請日期1998年10月28日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月28日
發(fā)明者柴少愛, 陳念良, 毛江森, 高麗美, 錢汶, 黃海鷹, 張峰, 陳卓, 忻亞娟, 毛子安, 黃偉新, 王平, 陳軍, 袁建國, 莊昉成 申請人:浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院普康生物技術(shù)公司
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