專利名稱：生產(chǎn)紅霉素的工程菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生產(chǎn)紅霉素的工程菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紅霉素是一類大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，廣泛應(yīng)用于抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的感染。自1952 年發(fā)現(xiàn)以來(lái)，紅霉素及其衍生物在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用。目前紅霉素類抗生素年銷(xiāo)售額超過(guò)35億美元，位居抗生素銷(xiāo)售額第三位，被認(rèn)為是下一代治療耐藥性細(xì)菌的抗生素， 隨第二代紅霉素(如阿奇霉素、羅紅霉素、克拉霉素等)、第三代紅霉素(如泰利霉素)在日本和歐洲上市，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)紅霉素的需求大大增加。目前我國(guó)是世界最大的紅霉素原料生產(chǎn)國(guó)，但是主要還是依靠發(fā)酵生產(chǎn)，普遍存在紅霉素效價(jià)低的問(wèn)題。國(guó)內(nèi)提高紅霉素發(fā)酵效價(jià)主要是通過(guò)傳統(tǒng)的育種工作，如使用有效的化學(xué)或放射線隨機(jī)誘導(dǎo)菌種突變以提高菌株的抗生素產(chǎn)量，或者使用天然雜交或原牛質(zhì)體融合技術(shù)從突變篩選系的分支處組合預(yù)期基因以得到高產(chǎn)量的菌株。傳統(tǒng)的育種方法存在一些局限性，如目標(biāo)性差，篩選工作繁重，周期長(zhǎng)等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供生產(chǎn)紅霉素的工程菌及其應(yīng)用。本發(fā)明保護(hù)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入紅色糖多孢菌得到的重組菌；所述重組質(zhì)粒為將 ermE*啟動(dòng)子、eryBII蛋白的編碼基因和eryF蛋白的編碼基因插入出發(fā)載體的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒；所述重組質(zhì)粒中由ermE*啟動(dòng)子啟動(dòng)所述eryBII蛋白的編碼基因和所述 eryF蛋白的編碼基因的表達(dá)；所述紅色糖多孢菌的ATCC編號(hào)為11635 ;所述ermE*啟動(dòng)子如序列表的序列I所不；所述eryBII蛋白如序列表的序列2所不；所述eryF蛋白如序列表的序列4所示。所述eryBII蛋白的編碼基因可如序列表的序列3所不；所述eryF蛋白的編碼基因可如序列表的序列5所示。所述重組質(zhì)粒中，自上游至下游可依次包括所述ermE*啟動(dòng)子、所述eryBII蛋白的編碼基因和所述eryF蛋白的編碼基因。所述出發(fā)載體具體可為載體PSET152。所述重組質(zhì)粒具體可為將所述ermE*啟動(dòng)子插入所述載體pSET152的XbaI酶切位點(diǎn)、所述eryBII蛋白的編碼基因插入所述載體pSET152的BamHI和EcoRI酶切位點(diǎn)之間、 所述eryF蛋白的編碼基因插入所述載體pSET152的EcoRI酶切位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。所述重組菌具體可為紅色糖多抱菌(Saccharopolyspora erythraea)MFSEOO15。 紅色糖多抱菌(Saccharopolyspora erythraea)MFSEOO15簡(jiǎn)稱紅色糖多抱菌MFSE0015,已于2012年3月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC ;地址中國(guó)武漢，武漢大學(xué)；郵編:430072)，保藏編號(hào)為 CCTCC NO M 2012052。以上任一所述重組菌均可用于生產(chǎn)紅霉素。
本發(fā)明還保護(hù)一種生產(chǎn)紅霉素的方法，包括如下步驟將以上任一所述的重組菌進(jìn)行發(fā)酵，得到紅霉素。所述發(fā)酵的條件可為33. 5°C、振蕩培養(yǎng)6天。所述發(fā)酵采用的發(fā)酵培養(yǎng)基具體如下由溶質(zhì)和水組成；每50!111發(fā)酵培養(yǎng)基含如下溶質(zhì)35g玉米淀粉、30g黃豆餅粉、30g糊精、0.6ml正丙醇、2g硫酸銨、12ml豆油和6g碳酸鈣。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH具體可為7。所述重組菌具體可以以種子液的方式接種至所述發(fā)酵培養(yǎng)基。所述種子液是將所述重組菌接種至種子培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)得到的。所述種子液與所述發(fā)酵培養(yǎng)基的體積配比具體可為I : 10。所述培養(yǎng)的條件可為33. 5°C、振蕩培養(yǎng)2天。所述種子培養(yǎng)基由溶質(zhì)和水組成；每50ml種子培養(yǎng)基含如下溶質(zhì)50g玉米淀粉、15g黃豆餅粉、12ml玉米楽；、1. 5g氯化鈉、I. 5g硫酸銨、7ml豆油和6g碳酸鈣。所述種子培養(yǎng)基的pH具體可為7。以上任一所述重組菌均可用于生產(chǎn)微生物抑制劑。所述微生物可為短小芽孢桿菌，具體可為CMCC編號(hào)為63202的短小芽孢桿菌。本發(fā)明還保護(hù)一種生產(chǎn)微生物抑制劑的方法，包括如下步驟將以上任一所述的重組菌進(jìn)行發(fā)酵，得到微生物抑制劑。所述發(fā)酵的條件可為33. 5°C、振蕩培養(yǎng)6天。所述發(fā)酵采用的發(fā)酵培養(yǎng)基具體如下由溶質(zhì)和水組成；每50!111發(fā)酵培養(yǎng)基含如下溶質(zhì)35g玉米淀粉、30g黃豆餅粉、30g糊精、0.6ml正丙醇、2g硫酸銨、12ml豆油和6g碳酸鈣。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH具體可為7。所述重組菌具體可以以種子液的方式接種至所述發(fā)酵培養(yǎng)基。所述種子液是將所述重組菌接種至種子培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)得到的。每100毫升所述種子液中含有10-15g濕重的菌體。所述種子液與所述發(fā)酵培養(yǎng)基的體積配比具體可為I : 10。所述培養(yǎng)的條件可為33. 5°C、振蕩培養(yǎng)2天。所述種子培養(yǎng)基由溶質(zhì)和水組成；每50ml種子培養(yǎng)基含如下溶質(zhì)50g玉米淀粉、15g黃豆餅粉、12ml玉米楽；、1. 5g氯化鈉、I. 5g硫酸銨、7ml豆油和6g碳酸鈣。所述種子培養(yǎng)基的PH具體可為7。所述微生物可為短小芽孢桿菌，具體可為CMCC編號(hào)為63202的短小芽孢桿菌。本發(fā)明運(yùn)用代謝工程的手段對(duì)紅霉素產(chǎn)生菌進(jìn)行分子改造，在強(qiáng)啟動(dòng)子ErmE*作用下增加紅霉素代謝途徑中關(guān)鍵酶eryBII基因及eryF基因的拷貝數(shù)，從而提高紅霉素效價(jià)。本發(fā)明提供的工程菌可直接發(fā)酵得到紅霉素，發(fā)酵液中的紅霉素效價(jià)可達(dá)8000U/ml，生產(chǎn)成本低，是一種具有生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值的生產(chǎn)菌株。


圖I為載體pSET152的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為重組質(zhì)粒pSET152 — ermE*的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3為重組質(zhì)粒pSET152 — ermE*_eryBII的結(jié)構(gòu)示意圖。圖4為重組質(zhì)粒pSET152-ermE*-eryBII_eryF的結(jié)構(gòu)不意圖。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。紅色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea),又稱糖多孢紅霉菌,獲自美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)01 :// 冊(cè).&丨(^.0找/，簡(jiǎn)稱4了0)，編號(hào)為11635，簡(jiǎn)稱紅色糖多孢菌 11635，是一類放線菌類微生物。短小芽孢桿菌購(gòu)自國(guó)家微生物菌種資源庫(kù)(簡(jiǎn)稱CMCC,網(wǎng)址為http://matrs. com/)，編號(hào)為63202，簡(jiǎn)稱短小芽孢桿菌63202。紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息庫(kù)，C13203490-紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品。實(shí)施例I、重組質(zhì)粒 pSET152-ermE*-eryBII_eryF 的構(gòu)建一、重組質(zhì)粒pSET152_ermE*的構(gòu)建I、合成序列表的序列I所示的雙鏈DNA分子(序列I中，自5’末端第10至225 位核苷酸為紅酶素啟動(dòng)子ermE*，第4至9位核苷酸為XbaI酶切識(shí)別序列，第226至231位核苷酸為XbaI酶切識(shí)別序列)。2、用限制性內(nèi)切酶XbaI酶切步驟I合成的雙鏈DNA分子，回收酶切產(chǎn)物。3、用限制性內(nèi)切酶XbaI酶切載體pSET152 (長(zhǎng)沙贏潤(rùn)生物技術(shù)有限公司，結(jié)構(gòu)示意圖見(jiàn)圖1，大腸桿菌和鏈霉菌的穿梭質(zhì)粒)，回收載體骨架(約5700bp)。4、將步驟2的酶切產(chǎn)物和步驟3的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒pSET152_ermE*。 重組質(zhì)粒pSET152-ermE*的結(jié)構(gòu)示意圖見(jiàn)圖2。根據(jù)測(cè)序結(jié)果,對(duì)重組質(zhì)粒pSET152_ermE* 進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下在載體pSET152的XbaI酶切位點(diǎn)之間插入了序列表的序列I自5’末端第10至225位核苷酸所示的DNA分子。二、重組質(zhì)粒 pSET152_ermE*-eryBII 的構(gòu)建I、以紅色糖多孢菌11635的基因組DNA為模板，用Fl和Rl組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。Fl :5 ’ -CGGGATCCATGACCACCGACGCCGCGACG-3 ’(下劃線標(biāo)注 BamHI 酶切識(shí)別序列)；Rl :5’ -CGGAATTCTCACTGCAACCAGGCTTCCGG-3> (下劃線標(biāo)注為 EcoRI 酶切識(shí)別序列)。Fl和Rl的靶序列如序列表的序列3所示(序列表的序列3所示基因即為eryBII 基因，編碼序列表的序列2所不的eryBII蛋白)。PCR擴(kuò)增條件94°C預(yù)變性5分鐘；94°C變性I分鐘、56°C退火I分鐘、72°C延伸I 分鐘，30個(gè)循環(huán)；72°C保溫10分鐘。2、回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物(約IOOObp)并用限制性內(nèi)切酶BamHI和EcoRI進(jìn)行雙酶切， 回收酶切產(chǎn)物。3、用限制性內(nèi)切酶BamHI和EcoRI雙酶切重組質(zhì)粒pSET152_ermE*，回收載體骨架 (約 5900bp)。4、將步驟2的酶切產(chǎn)物和步驟3的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒pSET152_ermE*-eryBII。根據(jù)測(cè)序結(jié)果,對(duì)重組質(zhì)粒 pSET152_ermE*-eryBII 進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下在重組質(zhì)粒pSET152-ermE*的BamHI和EcoRI酶切位點(diǎn)之間插入了序列表的序列3所示的DNA分子。重組質(zhì)粒pSET152-ermE*-eryBII的結(jié)構(gòu)示意圖見(jiàn)圖3。三、重組質(zhì)粒pSET152-ermE*-eryBII_eryF 的構(gòu)建
I、以紅色糖多孢菌11635的基因組DNA為模板，用F2和R2組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。F2 :5 ’ -CGGAATTCATGACGACCGTTCCCGATCTC-3 ’(下劃線標(biāo)注 EcoRI 酶切識(shí)別序列)；R2 5，-CGGAATTCTCATCCGTCGAGCCGCACCGG-3，(下劃線標(biāo)注 EcoRI 酶切識(shí)別序列)。F2和R2的祀序列如序列表的序列5所不(序列表的序列5所不基因即為eryF基因，編碼序列表的序列4所不的eryF蛋白)。PCR擴(kuò)增條件94°C預(yù)變性5分鐘；94°C變性I分鐘、56°C退火I分鐘、72°C延伸I 分鐘10秒，30個(gè)循環(huán)；72°C保溫10分鐘。2、回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物(約1200bp)并用限制性內(nèi)切酶EcoRI進(jìn)行酶切，回收酶切產(chǎn)物。3、用限制性內(nèi)切酶EcoRI酶切重組質(zhì)粒pSET152-ermE*-eryBII，回收載體骨架 (約 6900bp)。4、將步驟2的酶切產(chǎn)物和步驟3的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒pSET152-ermE*-eryBII_eryF。 根據(jù)測(cè)序結(jié)果，對(duì)重組質(zhì)粒 pSET152-ermE*-eryBII_eryF 進(jìn)行結(jié)構(gòu)描述如下在重組質(zhì)粒 pSET152_ermE*-eryBII 的EcoRI酶切位點(diǎn)插入了序列表的序列5所示的DNA分子。重組質(zhì)粒 pSET152-ermE*-eryBII_eryF 的結(jié)構(gòu)不意圖見(jiàn)圖 4。實(shí)施例2、工程菌的構(gòu)建將重組質(zhì)粒pSET152-ermE*-eryBII_eryF電擊轉(zhuǎn)化紅色糖多孢菌11635原生質(zhì)體，然后用Fl和R2組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR鑒定(顯示約2200bp的特異條帶的為PCR鑒定陽(yáng)性)得到重組菌。將一株重組菌命名為紅色糖多抱菌(Saccharopolysporaerythraea)MFSEOO15。 紅色糖多抱菌(Saccharopolyspora erythraea)MFSEOO15簡(jiǎn)稱紅色糖多抱菌MFSE0015,已于2012年3月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC ;地址中國(guó)武漢，武漢大學(xué)；郵編:430072)，保藏編號(hào)為 CCTCC NO M 2012052。實(shí)施例3、應(yīng)用紅色糖多孢菌MFSE0015生產(chǎn)紅霉素一、應(yīng)用紅色糖多孢菌MFSE0015生產(chǎn)紅霉素I、將紅色糖多孢菌MFSE0015接種于斜面培養(yǎng)基，33. 5°C培養(yǎng)7天(產(chǎn)生大量孢子)。斜面培養(yǎng)基由溶質(zhì)和水組成；溶質(zhì)及其在斜面培養(yǎng)基中的濃度如下玉米淀粉lg/100ml、玉米衆(zhòng)I. 2g/100ml、硫酸銨0. 3g/100ml、氯化鈉0. 3g/100ml、碳酸隹丐 0. 25g/100ml 和瓊脂粉 2. 0g/100ml。2、從步驟I的斜面培養(yǎng)基取Icm2大小的方塊接種至50ml種子培養(yǎng)基(在500毫升三角瓶中) 33. 5°C、240rpm振蕩培養(yǎng)2天,得到種子液(每100暈升種子液中含有10_15g 濕重的菌體)。種子培養(yǎng)基(pH7)由溶質(zhì)和水組成；每50ml種子培養(yǎng)基含如下溶質(zhì)50g玉米淀粉、15g黃豆餅粉、12ml玉米楽；、1. 5g氯化鈉、I. 5g硫酸銨、7ml豆油和6g碳酸隹丐。3、取5ml的種子液轉(zhuǎn)接至50ml發(fā)酵培養(yǎng)基(在500毫升三角瓶中)，33. 5 °C、240rpm振蕩培養(yǎng)6天。發(fā)酵培養(yǎng)基(pH7)由溶質(zhì)和水組成；每50ml發(fā)酵培養(yǎng)基含如下溶質(zhì)35g玉米淀粉、30g黃豆餅粉、30g糊精、O. 6ml正丙醇、2g硫酸銨、12ml豆油和6g碳酸隹丐。4、將步驟3的發(fā)酵體系離心(4500rpm、15min),收集上清液(發(fā)酵液)。二、對(duì)照液的制備將紅色糖多孢菌11635代替紅色糖多孢菌MFSE0015進(jìn)行步驟一的實(shí)驗(yàn)，收集上清液(對(duì)照液)。三、測(cè)定發(fā)酵液的紅霉素的效價(jià)(磷酸法，為紅霉素效價(jià)測(cè)定的通用方法)I、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制(I)將紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)先用少量乙酸溶解，然后用蒸餾水配成1000U/ml的母液。(2)將母液用蒸餾水依次稀釋為如下濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100U/ml、150U/ml、 200U/ml、300U/ml、400U/ml。(3)吸取2. Oml標(biāo)準(zhǔn)品溶液于25ml容量瓶中，加入IOml IOM磷酸水溶液，在沸水浴中煮沸3分鐘，然后冷卻至室溫，再用IOM磷酸水溶液定容至25ml，搖勻，采用用721分光光度計(jì)在485nm處測(cè)定吸光度(采用Icm比色皿；用蒸餾水作為空白對(duì)照)。(4)以效價(jià)為縱坐標(biāo)(單位為U)，以吸光度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y= 801. 96Χ+37. 615。2、測(cè)定發(fā)酵液的紅霉素的效價(jià)將步驟一得到的發(fā)酵液(或步驟二得到的對(duì)照液)用蒸餾水稀釋至10倍體積，然后吸取2. Oml于25ml容量瓶中，加入IOml IOM磷酸水溶液，在沸水浴中煮沸3分鐘，然后冷卻至室溫，再用IOM磷酸水溶液定容至25ml，搖勻，采用用721分光光度計(jì)在485nm處測(cè)定吸光度(采用Icm比色皿；用蒸餾水作為空白對(duì)照)。將吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，再乘以稀釋倍數(shù)，得到發(fā)酵液的紅霉素效價(jià)。發(fā)酵液的紅霉素效價(jià)為8000U/ml，而對(duì)照液的紅霉素效價(jià)為3680U/ml。四、紅霉素發(fā)酵液的抑菌作用利用管碟法進(jìn)行發(fā)酵液和對(duì)照液的抑菌實(shí)驗(yàn)。取直徑約90mm、高16mm的平底雙碟，分別注入加熱融化的培養(yǎng)基(蛋白胨5g/L、 牛肉浸出粉3g/L、磷酸氫二鉀3g/L、瓊脂20g/L，其余為水)20mL，使在碟底內(nèi)均勻攤布， 放置水平臺(tái)上凝固，作為底層；另取5ml培養(yǎng)基加熱融化后，冷卻至45°C，加入3mL濃度為 I X 106cfu/mL的短小芽孢桿菌63202菌懸液，搖勻，倒入雙碟中，作為上層含菌層。放置水平臺(tái)上冷卻后，在碟中以等距離安置牛津杯(直徑為6. Omm)四個(gè)，備用。將發(fā)酵液(或?qū)φ找?用無(wú)菌PBS緩沖液稀釋至10倍體積后，加入牛津杯中(每個(gè)牛津杯加入100 μ L)， 37°C培養(yǎng)15小時(shí)后，測(cè)量抑菌圈大小。PBS緩沖液(pH7. 8):取5. 59g磷酸氫二鉀和O. 41g磷酸二氫鉀，用水溶解并定容至 IOOOmL,過(guò)濾;115°C滅菌 30min。。發(fā)酵上清液抑菌圈的大小約2. 23cm,對(duì)照液抑菌圈的大小約為I. 03cm。
權(quán)利要求
1.將重組質(zhì)粒導(dǎo)入紅色糖多孢菌得到的重組菌；所述重組質(zhì)粒為將ermE*啟動(dòng)子、 eryBII蛋白的編碼基因和eryF蛋白的編碼基因插入出發(fā)載體的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒；所述重組質(zhì)粒中由ermE*啟動(dòng)子啟動(dòng)所述eryBII蛋白的編碼基因和所述eryF蛋白的編碼基因的表達(dá)；所述紅色糖多孢菌的ATCC編號(hào)為11635 ;所述ermE*啟動(dòng)子如序列表的序列I所不；所述eryBII蛋白如序列表的序列2所不；所述eryF蛋白如序列表的序列4所/Jn o
2.如權(quán)利要求I所述的重組菌，其特征在于所述eryBII蛋白的編碼基因如序列表的序列3所不；所述eryF蛋白的編碼基因如序列表的序列5所不。
3.如權(quán)利要求I或2所述的重組菌，其特征在于所述重組質(zhì)粒中，自上游至下游依次包括所述ermE*啟動(dòng)子、所述eryBII蛋白的編碼基因和所述eryF蛋白的編碼基因。
4.如權(quán)利要求I或2或3所述的重組菌，其特征在于所述出發(fā)載體為載體PSET152。
5.如權(quán)利要求4所述的重組菌，其特征在于所述重組質(zhì)粒為將所述ermE*啟動(dòng)子插入所述載體PSET152的XbaI酶切位點(diǎn)、所述eryBII蛋白的編碼基因插入所述載體pSET152 的BamHI和EcoRI酶切位點(diǎn)之間、所述eryF蛋白的編碼基因插入所述載體pSET152的EcoRI 酶切位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。
6.如權(quán)利要求5所述的重組菌，其特征在于所述重組菌為紅色糖多孢菌 (Saccharopolyspora erythraea) MFSEOO15，它的保藏編號(hào)為 CCTCC NO M 2012052。
7.權(quán)利要求I至6中任一所述的重組菌在生產(chǎn)紅霉素中的應(yīng)用。
8.一種生產(chǎn)紅霉素的方法，包括如下步驟將權(quán)利要求I至6中任一所述的重組菌進(jìn)行發(fā)酵，得到紅霉素。
9.權(quán)利要求I至6中任一所述的重組菌在生產(chǎn)微生物抑制劑中的應(yīng)用。
10.一種生產(chǎn)微生物抑制劑的方法，包括如下步驟將權(quán)利要求I至6中任一所述的重組菌進(jìn)行發(fā)酵，得到微生物抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了生產(chǎn)紅霉素的工程菌及其應(yīng)用。本發(fā)明保護(hù)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入紅色糖多孢菌得到的重組菌；所述重組質(zhì)粒為將ermE*啟動(dòng)子、eryBII蛋白的編碼基因和eryF蛋白的編碼基因插入出發(fā)載體的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒；所述重組質(zhì)粒中由ermE*啟動(dòng)子啟動(dòng)所述eryBII蛋白的編碼基因和所述eryF蛋白的編碼基因的表達(dá)；所述紅色糖多孢菌的ATCC編號(hào)為11635。本發(fā)明的提供的工程菌可直接發(fā)酵得到紅霉素，發(fā)酵液中的紅霉素效價(jià)可達(dá)8000U/ml，生產(chǎn)成本低，是一種具有生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值的生產(chǎn)菌株。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK102604879SQ20121009191
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月31日
發(fā)明者吳偉斌, 吳松剛, 施巧琴, 翁雪清, 趙燕玉, 黃祥峰, 黃維錦, 黃欽耿 申請(qǐng)人:福建省麥丹生物集團(tuán)有限公司