專利名稱：具有胃腸道運(yùn)動刺激活性的胃動素樣多肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的多肽，它們具有很強(qiáng)的胃腸道運(yùn)動刺激活性和增強(qiáng)代謝穩(wěn)定性，可用于治療以胃腸道基本運(yùn)動能力下降為特征的疾病，如糖尿病性胃麻痹、麻痹性腸梗阻和手術(shù)后腸梗阻。
胃動素(Motilin)是一種能夠刺激胃竇、十二指腸和結(jié)腸的胃腸道的直鏈多肽激素。盡管這種激素的作用尚不十分清楚，但它的確具有增強(qiáng)胃蠕動和刺激胃蛋白酶分泌的功能，而且對于調(diào)節(jié)消化期間綜合肌電可能也起重要作用。人類胃動素尚未純化，但從其免疫學(xué)特性來看與豬胃動素十分相似。豬胃動素由22個氨基酸殘基組成，可由下式表示10 20N-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Met-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly-Gln-OH豬胃動素在第1位至第5位氨基;酸殘基之間有一疏水區(qū)，在第11至22位氨基酸殘基之間有一親水區(qū)，在第6至10位氨基酸殘基之間有一連接區(qū)。豬胃動素在其一級序列的第9至20位氨基酸殘基之間還有一個二級α螺旋結(jié)構(gòu)[Khan et al.，Biochemistry29，5743-5751(1990)]。
胃動素用于健康人可加速腸道內(nèi)容物的運(yùn)送，提高胃的排空能力。在體外實(shí)驗(yàn)中胃動素可刺激人和兔十二指腸平滑肌束和離體胃腸道平滑肌細(xì)胞的收縮。此外，胃動素及其某些衍生物在人和兔的胃竇組織中具有與放射標(biāo)記的胃動素的競爭位點(diǎn)，這種現(xiàn)象說明對于胃腸道特異性受體的刺激與胃動素的生理作用有關(guān)。據(jù)報道注入胃動素可刺激糖尿病性胃麻痹病人胃中固體和液體的排空[Peeters et al.，Gastroenterology 100，A480(1991)]。此外，胃動素已經(jīng)用于治療由胃腸道惡性腫瘤所致的麻痹性腸梗阻[Meyer et al.，Med.Klin.86，515-517(1991)]。
胃動素存在的主要問題是半衰期相當(dāng)短，在人類只有4.5分鐘[Christofides et al.，Gastroenterology 76，903-907(1979)]。半衰期短則必需連接給予這種激素以維持療效。
胃動素氨基末端的氨基酸序列和中部的某些氨基酸殘基對于收縮活性十分重要[Macielag et al.，Peptides 13，565-569(1992)；Peeters et al.，Peptides 13，1103-1107(1992)；Poitras et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.183，36-40(1992)]。胃動素樣多肽的羧基末端較短，從第12位氨基酸開始含有3至5個以肽鍵相連的基本氨基酸，在第1位至第11位殘基之間被各種不同的氨基酸取代，據(jù)報道胃動素樣多肽的活性并不會高于胃動素。關(guān)于胃動素樣多肽提高代謝穩(wěn)定性的功能尚未見報道[日本專利號2-311，495]。
此外，胃動素樣多肽具有很強(qiáng)的胃腸道運(yùn)動刺激活性，并且可提高代謝穩(wěn)定性，因此可用于治療胃腸道基本運(yùn)動功能下降。
本發(fā)明提供了由下式表示的具有胃腸道運(yùn)動刺激活性的多肽，包括其光學(xué)活性異構(gòu)體和可藥用的酸加成鹽 其中A是親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體；B是L-脯氨酸和L-丙氨酸；D是親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體；E是芳香族、親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體；F是芳香族或雜環(huán)氨基酸的L-型立體異構(gòu)體；G是甘氨酸或D-丙氨酸；H是L-谷氨酸或L-谷氨酰胺；I是L-谷氨酰胺、L-谷氨酸或L-丙氨酸；J是I和基團(tuán)-NH-之間的一個化學(xué)鍵，或選自以下基團(tuán)中的一個基團(tuán)Z，Z-Leu，Z-Leu-Gln，Z-Leu-Gln-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys，和Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly，其中Z選自精氨酸、D-精氨酸、D-高精氨酸、D-賴氨酸、D-鳥氨酸、D-2，4-二氨基丁酸、D-谷氨酰胺、D-天冬酰胺和D-丙氨酸；
R1是低級烷基或烯丙基；R2選自氫、低級烷基、炔丙基和烯丙基；R3選自氫、低級烷基和烯丙基；R4選自低級烷基、環(huán)烷基、取代或未取代的芳基和雜芳基，其中芳基可以被選自鹵素、羥基和低級烷氧基的一個或多個取代基所取代；R5選自-CH2CONH2、含有1-3個碳原子的氨基烷基、和含有2或3個碳原子的胍基烷基；R6是-COOH或-CONH2；m是數(shù)字0或1，星號表示可以是D或L構(gòu)型的不對稱碳原子，每個低級烷基含有1-4個碳原子，前提是(a)當(dāng)m為0時，R2和R3是氫，J是一化學(xué)鍵，-NH-*CH(CH2R5)R6基團(tuán)具有D-構(gòu)型；(b)只有當(dāng)J是Z-Leu或Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Ash-Lys-Gly時，R5才是-CH2CONH2；(c)當(dāng)m為0時，R2和R3是氫，J是Z，Z-Leu，Z-Leu-Gln，Z-Leu-Gln-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys，和Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly，其中Z具有D構(gòu)型；和(d)該多肽不是胃動素。
本發(fā)明提供的新型多肽具有很強(qiáng)的胃動素受體親合性，并能模仿胃動素的胃腸道蠕動效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)表明這種新型多肽可增加相應(yīng)器官組織勻漿生物降解穩(wěn)定性，因此該多肽也是更有效的體外前動力劑。胃動素樣多肽含有一個亮氨酸殘基代替了第13位的蛋氨酸，使其具有更高的化學(xué)穩(wěn)定性；含有一個D-精氨酸代替了第12位的L-精氨酸，使其效能增加且更穩(wěn)定；和在第1位上含有一個烷基化的苯丙氨酸，使其生物降解穩(wěn)定性增強(qiáng)。因此，本發(fā)明提供的多肽可用于治療以胃腸道基本運(yùn)動功能減弱為特征的疾病，如糖尿病性胃麻痹、麻痹性腸梗阻和手術(shù)后腸梗阻。
本發(fā)明不僅提供了具有很強(qiáng)胃腸運(yùn)動刺激活性的新型多肽，而且也提供了對哺乳動物，尤其是人類胃腸道基本運(yùn)動功能減弱性疾病的治療方法。治療方法包括給予哺乳動物治療有效量的式(1)所示的多肽，包括其旋光性異構(gòu)體和可藥用的酸加成鹽 在式(1)中，m是整數(shù)0或1，星號表示可以是D-或L-構(gòu)型的不對稱碳原子，每一個低級烷基含有1至4個碳原子，但條件是(a)當(dāng)m為0，R2和R3是氫，J是一個化學(xué)鍵時，-NH-CH(CH2R5)R6基團(tuán)具有D-構(gòu)型；(b)只有當(dāng)J是Z-Leu或Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly時，R5才是-CH2CONH2；(c)當(dāng)m＝0時，R2和R3是氫而且J是Z，Z-Leu，Z-Leu-Gln，Z-Leu-Gln-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Ash-Lys，和Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly，其中Z具有D構(gòu)型；和(d)該多肽并非胃動素；基團(tuán)A至J和R1至R5的定義同前。
在本發(fā)明式(1)定義的新化合物是由12至22個氨基酸組成的長度不等的多肽，其長度最好是12、14、16、18、20或22個氨基酸。構(gòu)成這種新型多肽的氨基酸的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)是本發(fā)明的一個重要特性。除非特別說明，單一氨基酸的絕對立體化學(xué)結(jié)構(gòu)是L型，但下述情況除外第1位[氨基末端氨基酸，(R1)m(R2)(R3)N-*CH(CH2R4)CO-]可以是L-型或D-型；第8位(G基團(tuán))可以是甘氨酸或D-丙氨酸；第12位可以是L-型或D-型；羧基末端氨基酸即-NH-*CH(CH2R5)R6，，可以是L-型或D-型。
本說明書采用的全部縮寫定義如下Phe-苯丙氨酸Tyr-酪氨酸Nle-正亮氨酸Leu-亮氨酸Cha-β-環(huán)己基丙氨酸Val-纈氨酸Ile-異亮氨酸
Gly-甘氨酸Ala-丙氨酸Glu-谷氨酸Gln-谷氨酰胺Arg-精氨酸h-Arg-高精氨酸Orn-鳥氨酸Dab-2，4-二氨基丁酸Lys-賴氨酸Asn-天冬酰胺Me-甲基Boc-叔丁氧羰基Cbz-芐氧羰基Dhbt-3，4-二氫-4-氧代苯并三嗪-3-基Fmoc-芴甲氧羰基Mbh-4，4′-二甲氧基二苯甲基Mtr-4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺酰基Pfp-五氟苯基Trt-三苯甲基BOP-苯并三唑氧基-三(二甲氨基)鏻六氟鏻酸鹽DCC-N，N′-二環(huán)己基碳化二亞胺DCM-二氯甲烷DIC-二異丙基碳化二亞胺DIEA-二異丙基乙胺
EDCC-N-Z乙氨基丙基-N′-環(huán)己基碳化二亞胺HBTU-2-(1H苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基糖醛鎓六氟磷酸鹽HEPES-[N-(2-羥乙基)哌嗪-N′-(2-乙烷磺酸)]HMPA-羥甲基苯氧乙酰氧基HOBt-1-羥基苯并三唑MBHA-4-甲基二苯甲基氨基PAM-羥甲基苯乙酰氨基甲基PyBrOP-六氟磷酸溴代三吡咯烷基鏻DMF-N，N-二甲基甲酰胺NMM-N-甲基嗎啉NMP-N-甲基吡咯烷酮TCA-三氯乙酸TEA-三乙胺TFA-三氟乙酸TFMSA-三氟甲烷磺酸。
第1位，氨基末端氨基酸，(R1)m(R2)(R3)N-*CH(CH2R4)CO-本發(fā)明多肽氨基末端第1位氨基酸，(R1)m(R2)(R3)N-*CH(CH2R4)CO-，可以是L-或D-構(gòu)型。R1是低級烷基或烯丙基；R2可選自氫、低級烷基、炔丙基和烯丙基；R3可選自氫、低級烷基和烯丙基。這里所說的、“低級烷基”是指含有1至4個碳原子的直鏈和支鏈烴基。R1、R2和R3適宜的低級烷基實(shí)例是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基和仲丁基，優(yōu)選甲基。
m是整數(shù)0或1，優(yōu)選的是0。當(dāng)m為0時，氨基殘基可以是伯胺，其中R2和R3是氫。氨基殘基也可以是仲胺、叔胺或季胺鹽(m為1)，即分別被一個、兩個或三個1至4個碳原子的低級烷基取代，其中優(yōu)選甲基或乙基。氨基殘基也可以被一個炔丙基取代，產(chǎn)生例如N-炔丙基、N-甲基N-炔丙基、N，N-二甲基-N-炔丙基取代的氨基殘基；或者可被多至三個烯丙基取代。氨基末端氨基酸最好是N-取代，取代基最好是1至3個甲基。
R4選自低級烷基、環(huán)烷基、取代的和未取代的芳基和雜芳基，其中芳基可以含有選自鹵素、羥基和低級烷氧基的一個或多個取代基。優(yōu)選的取代的和未取代的芳基基團(tuán)是苯基、對-氟苯基、對-氯苯基、對-溴苯基、對-碘苯基、對-羥基苯基、對-甲氧基苯基、1-萘基和2-萘基。優(yōu)選的雜芳基是3-吲哚基、2-噻吩基和3-吡啶基。優(yōu)選的環(huán)烷基是環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。R4最好選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、環(huán)己基、苯基、對-氟苯基、對-氯苯基、對-溴苯基、對-碘苯基、對-羥基苯基、對-甲氧基苯基、1-萘基、2-萘基、3-吲哚基、2-噻吩基和3-吡啶基組成的基團(tuán)。R4更為優(yōu)選的是選自苯基和環(huán)己基。(R1)m(R2)(R3)N-*CH(CH2R4)CO-可由下列氨基酸殘基實(shí)例衍生例如，苯丙氨酸、對-氟苯丙氨酸、對-氯苯丙氨酸、對-溴苯丙氨酸、對碘苯丙氨酸、酪氨酸、對-甲氧基苯丙氨酸、1-萘丙氨酸、2-萘丙氨酸、色氨酸、β-2-噻吩丙氨酸、β-3-吡啶丙氨酸、α-氨基丁酸、正纈氨酸、正亮氨酸、亮氨酸和環(huán)已基丙氨酸。就具有高胃腸蠕動活性的化合物而言，優(yōu)選的氨基末端氨基酸是L-苯丙氨酸、D-苯丙氨酸、L-環(huán)己基丙氨酸和D-環(huán)己基丙氨酸。
第2位，A基團(tuán)本發(fā)明多肽第2位上的A基團(tuán)是親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體。L-型親脂的脂肪族和脂環(huán)族氨基酸實(shí)例是L-纈氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-正纈氨酸、L-正亮氨酸和L-環(huán)己基丙氨酸。優(yōu)選的A基團(tuán)氨基酸是L-纈氨酸、L-亮氨酸和L-異亮氨酸。
第3位，B基團(tuán)本發(fā)明多肽第3位上的B基團(tuán)是一個氨基酸，它是L-脯氨酸或L-丙氨酸。對于具有高胃動素受體興奮活性的化合物，B基團(tuán)氨基酸最好是L-脯氨酸。
第4位，D基團(tuán)本發(fā)明多肽第4位上的D基團(tuán)是一個氨基酸，它是親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體。L-型親脂的脂肪族和脂環(huán)族氨基酸的實(shí)例是L-異亮氨酸、L-纈氨酸、L-亮氨酸、L-正纈氨酸、L-正亮氨酸和L-環(huán)己基丙氨酸。優(yōu)選的D基團(tuán)氨基酸是L-異亮氨酸、L-亮氨酸和L-環(huán)己基丙氨酸。
第5位，E基團(tuán)本發(fā)明多肽第5位上的E基團(tuán)是一個氨基酸，它是芳香族、親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體。L-芳香族、親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的實(shí)例是由苯丙氨酸、對-氟苯丙氨酸、對-氯苯丙氨酸、對-溴苯丙氨酸、對-碘苯丙氨酸、酪氨酸、對-甲氧基苯丙氨酸、1-萘丙氨酸、2-萘丙氨酸、亮氨酸和環(huán)己基丙氨酸衍生的殘基。L-苯丙氨酸和L-環(huán)己基丙氨酸是優(yōu)選的E基團(tuán)氨基酸。
第6位，L-蘇氨酸本發(fā)明多肽第6位上的氨基酸是L-蘇氨酸。
第7位，F(xiàn)基團(tuán)本發(fā)明多肽第7位上的F基團(tuán)是一個氨基酸，它是芳香族或雜芳族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體。芳香族和雜芳族氨基酸的實(shí)例是酪氨酸、苯丙氨酸、對-甲氧基苯丙氨酸、組氨酸、色氨酸、β-2-噻吩丙氨酸和β-3-吡啶丙氨酸。優(yōu)選的F基團(tuán)氨基酸是L-酪氨酸、L-組氨酸和L-苯丙氨酸。
第8位，G基團(tuán)本發(fā)明多肽第8位上的G基團(tuán)是一個氨基酸，它是甘氨酸或D-丙氨酸，最好是甘氨酸。
第9位，H基團(tuán)本發(fā)明多肽第9位上的H基團(tuán)是一個氨基酸，它是L-谷氨酸或L-谷氨酰胺，最好是L-谷氨酸。
第10位，L-型亮氨酸本發(fā)明多肽第10位上的氨基酸是L-亮氨酸。
第11位，I基團(tuán)本發(fā)明多肽第11位上的I基團(tuán)是一個氨基酸，它是L-谷氨酰胺、L-谷氨酸或L-丙氨酸。優(yōu)選的I基團(tuán)氨基酸是L-谷氨酰胺和L-丙氨酸。
J基團(tuán)本發(fā)明多肽的J基團(tuán)可以是I基團(tuán)和-NH-基團(tuán)之間的一個化學(xué)鍵，也可以是選自下列的基團(tuán)Z，Z-Leu，Z-Leu-Gln，Z-Leu-Gln-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys，和Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly，最好是選自下列基團(tuán)Z-Leu，Z-Leu-Gln-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn，和Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly，其中Z基團(tuán)是一個氨基酸，選自精氨酸、D-精氨酸、D-高精氨酸、D-賴氨酸、D-鳥氨酸、D-2，4-二氨基丁酸、D-谷氨酰胺、D-天門冬酰胺和D-丙氨酸；優(yōu)選選自精氨酸、D-精氨酸、D-谷氨酰胺和D-丙氨酸。
第12位當(dāng)多肽的J基團(tuán)是I基團(tuán)與-NH-基團(tuán)之間的一個化學(xué)鍵時，本發(fā)明多肽是十二肽，并且第12位氨基酸就是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R5。當(dāng)J基團(tuán)是一個化學(xué)鍵，且該多肽的第1位上的R2和R3基團(tuán)是氫時，第12位上的氨基酸具有D-構(gòu)型。R5基團(tuán)是一個含有1至3個碳原子的氨基烷基，或者是含有2或3個碳原子的胍基烷基，最好是選自含有2或3個碳原子的胍基烷基。優(yōu)選的氨基烷基是氨甲基、2-氨乙基和3-氨基正丙基。優(yōu)選的胍基烷基是N-2-胍乙基和N-3-胍基正丙基。R5基團(tuán)是-COOH或-CONH2，最好是-CONH2。在本實(shí)施例中，本發(fā)明多肽的羧基末端部分即-NH-*CH(CH2R5)-R6的氨基酸，最好是選自精氨酸、D-精氨酸、賴氨酸、D-賴氨酸′D-鳥氨酸、D-2，4-二氨基丁酸和D-高精氨酸，更為優(yōu)選的是選自精氨酸、D-精氨酸和賴氨酸。
當(dāng)多肽的J基團(tuán)不是I基團(tuán)和-NH-基團(tuán)之間的一個化學(xué)鍵時，第12位氨基酸是Z基團(tuán)。如上所述，Z基團(tuán)是一個氨基酸，選自精氨酸、D-精氨酸、D-高精氨酸、D-賴氨酸、D-鳥氨酸、D-2，4-二氨基丁酸、D-谷氨酰胺、D-天門冬酰胺和D-丙氨酸。Z基團(tuán)最好是選自精氨酸、D-精氨酸、D-谷氨酰胺和D-丙氨酸，更為優(yōu)選的Z基團(tuán)是D-精氨酸。當(dāng)本發(fā)明多肽第1位上的R2和R3基團(tuán)是氫時，Z基團(tuán)的氨基酸具有D-構(gòu)型。
第13位當(dāng)本發(fā)明的多肽是十三肽時，第13位氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，它可以具有L-或D-構(gòu)型，而且可選自賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，優(yōu)選L-賴氨酸或D-賴氨酸。
當(dāng)本發(fā)明的多肽長于十三肽時，第13位氨基酸是L-亮氨酸。
第14位當(dāng)本發(fā)明的多肽是十四肽時，第14位氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即，-NH-*CH(CH2R5)-R6它可以是L-或D-構(gòu)型，而且可選自谷氨酰胺、賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸、D-賴氨酸、L-谷氨酰胺和D-谷胺酰胺。
當(dāng)本發(fā)明的多肽長于十四肽時，該多肽第14位氨基酸是L-谷氨酰胺。
第15位當(dāng)本發(fā)明的多肽是十五肽時，第15位氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，它可以是L-或D-構(gòu)型，而且可選自賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸或D-賴氨酸。
當(dāng)本發(fā)明的多肽長于十五肽時，第15位氨基酸是L-谷氨酸。
第16位當(dāng)本發(fā)明的多肽是十六肽時，第16位氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，它可以是L-或D-構(gòu)型，而且可以選自賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸或D-賴氨酸。
當(dāng)本發(fā)明的多肽長于十六肽時，該多肽第16位氨基酸是L-賴氨酸。
第17位當(dāng)本發(fā)明的多肽是十七肽時，第17位氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，可以是L-或D-構(gòu)型，而且可以選自賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸或D-賴氨酸。
當(dāng)本發(fā)明的多肽長于十七肽時，第17位氨基酸是L-谷氨酸。
第18位當(dāng)本發(fā)明的多肽是十八肽時，第18位氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，它可以是L-或D-構(gòu)型，而且可以選自賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸、D-賴氨酸、L-精氨酸和D-精氨酸。
當(dāng)本發(fā)明的多肽長于十八肽時，該多肽的第18位氨基酸是L-精氨酸。
第19位當(dāng)本發(fā)明的多肽是十九肽時，第19位氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，它可以是L-或D-構(gòu)型，而且可選自賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸或D-賴氨酸。
當(dāng)本發(fā)明的多肽長于19肽時，其第19位的氨基酸是L-天冬酰胺。
第20位當(dāng)本發(fā)明的多肽由20個氨基酸組成時，第20位的氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，它可以是L-或D-構(gòu)型，而且可以選自賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸或D-賴氨酸。
當(dāng)本發(fā)明的多肽超過20個氨基酸時，該多肽的第20位氨基酸是L-賴氨酸第21位當(dāng)本發(fā)明的多肽由21個氨基酸組成時，第21位的氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，它可以是L-或D-構(gòu)型，而且可以選自賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸或D-賴氨酸。
當(dāng)本發(fā)明的多肽超過21個氨基酸時，第21位的氨基酸是甘氨酸。
第22位本發(fā)明的某些多肽的第22位氨基酸是該多肽的羧基末端部分，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，它可以是L-或D-構(gòu)型，而且可以選自谷氨酰胺、賴氨酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、精氨酸和高精氨酸，最好是選自L-賴氨酸、D-賴氨酸、L-谷氨酰胺和D-谷氨酰胺組。
羧基末端氨基酸，-NH-*CH(CH2R5)-R6本發(fā)明多肽的羧基末端位置上存在的殘基，即-NH-*CH(CH2R5)-R6，是帶有羧基末端羧酸衍生物R6的氨基酸，其中R6是-COOH或-CONH2，最好是-CONH2。R5的定義同前。
本文所用的術(shù)語“環(huán)烷基”是指含有5至7個碳原子的環(huán)烴基。適宜的環(huán)烴基實(shí)施是環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。本文所用的術(shù)語“鹵素”包括所有的四種鹵族元素，優(yōu)選氯。
在優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明化合物選自H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly-Gln-OH；H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln- Lys- 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-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Ne2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；和(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；以及上述化合物的可藥用的加成鹽。在每一實(shí)施例中，除非特別說明，氨基酸具有L-構(gòu)型。在更優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明化合物選自(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lyr-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lya-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-The-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2；以及上述化合物的可藥用的加成鹽。在最為優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明化合物選自(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ila-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ila-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ale-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Ala-Ila-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(Me2N )-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2；(N-Me)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Lys-NH2；(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2；以及上述化合物的可藥用的加成鹽。
本發(fā)明的化合物可用本領(lǐng)域已知的各種方法來制備，例如固相多肽合成法或經(jīng)典的液相合成法。在固相合成法中，通常使用一種樹脂載體，例如聚苯乙烯樹脂、Polyhipe或聚丙烯酰胺/硅藻土復(fù)合樹脂依次地合成肽鏈。增長的肽鏈與樹脂載體是通過適當(dāng)?shù)乃岵环€(wěn)定的分子連接部分連接的，例如，羥甲基苯乙酰氨基甲基(PAM)、4-甲基二苯甲基氨基(MBHA)或羥甲基苯氧乙酰氧基(HMPA)部分。然后采用氟化氫、三氟乙酸(TFA)、三氟甲烷磺酸(TFMSA)等類似化合物進(jìn)行酸水解，肽鏈可在連接分子的連接部分?jǐn)嚅_，從而脫離樹脂載體。
本發(fā)明的胃腸運(yùn)動刺激多肽的制備無論是采用固相法還是液相法，其基本合成步驟都包括通過一個適當(dāng)保護(hù)的氨基酸或多肽的羧基部分與另一個適當(dāng)保護(hù)的氨基酸或多肽氨基進(jìn)行反應(yīng)，使兩部分氨基酸亞單位偶合形成新的酰胺鍵。為實(shí)現(xiàn)偶合反應(yīng)，羧基部分必須活化?；罨捎脴?biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)試劑，例如DCC、DIC、EDCC、BOP、HBTU或PyBrOP.除使用PyBrOP時例外，可加入等摩爾的HOB t以抑制活化的氨基酸部分的外消旋作用。在活化時必需采用相應(yīng)氨基酸的羧酸鹽的情況下，可加入諸如NMM、DIEA或TEA一類的堿。
另外，本發(fā)明的肽也可用另一種方法合成，即通過偶聯(lián)組分氨基酸的活性酯。所述活性酯實(shí)例包括五氯苯酯、五氟苯酯、對-硝基苯酯等。
在本發(fā)明肽的制備過程中氨基酸組分的其它反應(yīng)官能團(tuán)必需用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基保護(hù)。一般來講α-氨基保護(hù)基的特性決定了必需采用的側(cè)鏈保護(hù)基的類型。例如，當(dāng)α-氨基作為其Boc衍生物被保護(hù)時，側(cè)鏈保護(hù)通常采用苯甲醇的酯、醚或氨基甲酸乙酯衍生物來完成。環(huán)己醇的酯和醚衍生物也已有一些成功的應(yīng)用。但對比之下，當(dāng)α-氨基作為其Fmoc衍生物被保護(hù)時，側(cè)鏈官能團(tuán)一般作為叔丁醇的酯、醚或氨基甲酸乙酯衍生物被保護(hù)。當(dāng)然尤其是當(dāng)本發(fā)明的肽采用液相法合成時，可以采用保護(hù)基的其它組合方式。
Fmoc α-氨基保護(hù)基用堿很容易除去，常用的堿是哌啶。在適當(dāng)?shù)奶兼f離子清除劑存在下用TFA處理可除去側(cè)鏈保護(hù)基，這也可以裂解肽羧基末端與樹脂連接的化學(xué)鍵。Boc保護(hù)基一般用稀TFA除去，但是經(jīng)TFA裂解后α-氨基以其TFA鹽的形式存在。為使不斷加長的肽鏈上的氨基保持對下一個氨基酸衍生物的反應(yīng)性，用堿如TEA或DIEA中和樹脂鍵合的肽。然后再用含有適當(dāng)?shù)那宄齽┑膹?qiáng)酸如氫氟酸或TFMSA使氨基酸側(cè)鏈去保護(hù)，并裂解肽與樹脂載體的連接鍵。
按照本發(fā)明提供了一種制備多肽的方法，所述多肽含有氨基末端部分(R1)m(R2)(R3)N-。當(dāng)m＝0；R2是氫或低級烷基；R3是低級烷基時，本發(fā)明方法包括將適當(dāng)保護(hù)的肽的氨基末端氨基基團(tuán)(NH2-(AA)n-)與適當(dāng)?shù)娜┗蛲蛪A金屬氫化物還原劑反應(yīng)，這里的肽是通過適當(dāng)?shù)倪B接物任選地與不溶性載體相連。例如，醛或酮可以是甲醛、乙醛或丙酮。例如，堿金屬氫化物可以是堿金屬氫硼化物如氰基硼氫化鈉等。這一方法在適當(dāng)?shù)娜軇┤鏒MF或NMP中室溫下很容易進(jìn)行，反應(yīng)中任選性地加入乙酸或1-羥基哌嗪乙烷磺酸(HEPES)。在美國專利號4,421,744中更為詳盡地介紹了這種方法，該文獻(xiàn)作為參考并入本文。
當(dāng)m＝1；R1和R3獨(dú)立地是低級烷基或烯丙基；而且R2選自低級烷基、烯丙基和炔丙基時，本發(fā)明方法包括將適當(dāng)保護(hù)的肽的氨基末端氨基基團(tuán)(NR2R3-(AA)n-)與結(jié)構(gòu)式R1Hal代表的化合物(其中R1的定義同前，Hal是鹵原子)反應(yīng)，這里的肽是通過適當(dāng)?shù)倪B接物任選地與不溶性載體相連。反應(yīng)在適當(dāng)?shù)乃峤Y(jié)合劑如碳酸鈉或碳酸鉀存在下，在適當(dāng)?shù)娜軇┤鏒MF或NMP中進(jìn)行。在[Benoiton-Chen，Proced.14th Europ.Pept.Symp.，(1976).P.149.]文獻(xiàn)中，更為詳盡地介紹了這種方法，該文獻(xiàn)作為參考文獻(xiàn)并入本文。
盡管本發(fā)明的化合物的游離堿形式是有效的，但為了提高穩(wěn)定性，便于結(jié)晶和增強(qiáng)溶解性等目的，通常以其可用藥用的酸加成鹽的形式制劑和給藥。這些酸加成鹽可用適當(dāng)?shù)臒o機(jī)酸或有機(jī)酸通過常規(guī)方法制備，酸的實(shí)例是鹽酸、硫酸、磺酸、酒石酸、延胡索酸、氫溴酸、乙醇酸、檸檬酸、馬來酸、磷酸、琥珀酸、醋酸、硝酸、苯甲酸、抗壞血酸、對-甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸、丙酸等。優(yōu)選的是由鹽酸、醋酸或琥珀酸制備的那些酸加成鹽。
本發(fā)明的化合物可以和可藥用載體結(jié)合提供一種藥用組合物。作為游離堿的本發(fā)明化合物的適宜載體包括丙二醇-乙醇-水、等滲水、無菌注射用水(USP)、艾穆爾弗爾TM-乙醇-水、可來摩弗爾-ELTM或本專業(yè)技術(shù)人員熟知的其它適宜載體。
本發(fā)明化合物的酸加成鹽的適宜載體包括等滲水和無菌注射用水(USP)，它們可單獨(dú)使用，或與乙醇、丙二醇或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其它常規(guī)溶解劑合并使用。優(yōu)選的載體是本發(fā)明化合物的等滲水溶液。
本發(fā)明的化合物可用于哺乳類動物(例如動物或人類)，其劑量應(yīng)足以產(chǎn)生期望的胃腸運(yùn)動刺激活性。由于本發(fā)明化合物的活性和期望的療效不同，本發(fā)明化合物的給藥劑量也有所不同。用藥的實(shí)際劑量還將取決于諸如病人體重和具體病人的個體反應(yīng)等公認(rèn)的因素。因此，對于具體病人(男性)的單元劑量可以不同，從最低劑量為約每公斤體重0.1μg開始，直到產(chǎn)生理想的療效，由醫(yī)生確定。優(yōu)選的最小劑量是每公斤體重1μg 。
本發(fā)明的化合物用前述的載體以無菌溶液或懸液的形式可以通過公認(rèn)的非腸道途徑給藥。按重量計(jì)算，這些制劑中最少應(yīng)含有約0.1％的本發(fā)明化合物，但這一含量的變化范圍可以在大約0.1％至50％之間。本發(fā)明化合物最好是靜脈內(nèi)給藥，給藥劑量一般每70公斤體重在約0.1μg至500mg之間，最好是約1μg至50mg。這一劑量每天可給藥1至4次。
無菌溶液或懸液也可以包括下列佐劑無菌稀釋劑，如無菌注射用水、鹽水、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑，如苯甲醇或?qū)αu苯甲酸甲酯；抗氧化劑，如抗壞血酸或偏亞硫酸氫鈉；螯合劑，如乙二胺四乙酸(EDTA)；緩沖劑，如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；滲透壓調(diào)節(jié)劑如氯化鈉或葡萄糖。非腸道制劑可密封保存于安瓶、一次性注射器或者玻璃或塑料的多劑量小瓶中。
本申請中參考了許多文獻(xiàn)，為了更詳細(xì)地描述現(xiàn)有技術(shù)，這些文獻(xiàn)的公開內(nèi)容并入本文作參考。
通過下列實(shí)施例將進(jìn)一步解釋本發(fā)明，給出實(shí)施例是為了說明本發(fā)明化合物和組合物的制備，而不是對本發(fā)明加以限制。
實(shí)施例1[12-D-精氨酸，13-亮氨酸]胃動素-(1-14)-肽(豬)雙(三氟乙酸)鹽H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH該多肽在2.0g Fmoc-L-Gln(Mbh)PepSyn KA樹脂(0.097毫當(dāng)量/克)上采用固相連續(xù)沖洗技術(shù)在9050型MilliGen肽合成儀上合成。在HOBt存在的情況下，除Thr是ODhbt酯外所有殘基均作為Fmoc氨基酸的Pfp酯被偶聯(lián)。側(cè)鏈保護(hù)如下D-Arg(Mtr)、Glu(OtBu)、Tyr(tBu)和Thr(tBu)。Gln未保護(hù)。在DMF中使用過量4倍摩爾的Fmoc氨基酸OPfp/HOBt進(jìn)行偶聯(lián)。偶聯(lián)效率用Kaiser試驗(yàn)來監(jiān)測。偶聯(lián)時間為1-4小時。在每個偶聯(lián)周期完成之后，用20％哌啶的DMF溶液除去Fmoc-α-氨基保護(hù)基。合成之后，樹脂鍵合的肽用DCM洗并真空下干燥過夜。加入含有5％苯硫基甲烷、3％乙二硫醇和2％苯甲醚的無水TFA(共20ml)室溫下振蕩8小時使肽去保護(hù)并與樹脂裂解。然后將裂解的溶液滴入250ml的冷乙醚中，過濾收集沉淀的肽，得到320 mg(85％)白色粉末狀的標(biāo)題肽。肽的純化采用高效液相色譜(HPLC)分三次(典型加樣量＝107mg/每次)在Waters Delta-Prep 3000色譜儀上完成，兩個C-18柱串聯(lián)(250×20mm，15μ，Vydac)。溶劑系統(tǒng)是0.1％TFA至60％乙腈/40％TFA(0.1％)的梯度洗脫30分鐘，流速20ml/每分鐘，紫外光檢測，波長220nm。各組份純度分析采用分析HPLC(30分鐘梯度洗脫，溶劑由100％TFA(0.1％)改變至100％乙腈，流速1ml/每分鐘，波長214nm；保留時間Rt＝17.37分)和毛細(xì)管層電泳。純凈組份(＞95％)合并凍干后，得到107mg(28％)絮樣白色粉末狀標(biāo)題多肽。
AAAThr0.87(1)，Glx3.02(3)，Gly1.04(1)，Val1.02(1)，Ile0.92(1)，Leu2.14(2)，Tyr1.00(1)，Phe1.93(2)，Arg0.93(1).FAB-MS(M＋H)+計(jì)算值1712，測定值1712.
實(shí)施例2[1-N-甲基苯丙氨酸、3-丙氨酸、11-丙氨酸，12-D-精氨酸，13-亮氨酸，14-D-賴氨酸]胃動素-(1-14)-肽酰胺(豬)三(三氟乙酸)鹽(N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-NH2該多肽在0.85g PAL樹脂(0.27毫當(dāng)量/克)上采用固相連續(xù)沖洗技術(shù)在9050型MilliGen肽合成儀上合成。將樹脂與3.4g的玻璃珠(經(jīng)酸洗，150-212μ)混合，干燥裝入連續(xù)沖洗柱中，使用前用DMF膨脹1小時。0.6M NMM的DMF溶液存在下Fmoc-MePhe-OH用BOP和HOBt(1∶1∶1)預(yù)活化后再偶聯(lián)。在HOBt存在下Fmoc-L-Thr-OH作為其ODhbt酯被偶聯(lián)。所有其它殘基均在HOBt存在下作為Fmoc氨基酸的Pfp酯被偶聯(lián)側(cè)鏈保護(hù)如下D-Arg(Mtr)、Glu(OtBu)、Tyr(tBu)、Thr(tBu)、D-Lys(Boc)、Gln(Trt)。偶聯(lián)時在DMF中使用四倍摩爾過量的Fmoc氨基酸衍生物。偶聯(lián)效率采用Kaiser試驗(yàn)來監(jiān)測。典型的偶聯(lián)時間為1-4小時。在每個偶聯(lián)周期完成之后，用20％哌啶的DMF溶液除去Fmoc-α-氨基保護(hù)基。合成之后，樹脂鍵合的肽用DCM沖洗，并真空干燥過夜。用含有5％苯硫基甲烷、3％乙二硫醇和2％苯甲醚的無水TFA(共20ml)在室溫下振蕩8小時使肽去保護(hù)并裂解與樹脂脫離。然后將裂解的溶液滴入250ml的冷乙醚中，過濾收集沉淀的肽，得到210mg(91％)白色粉末的標(biāo)題多肽。該肽的純化采用高效液相色譜(HPLC)分三次(典型加樣量＝70mg/次)在WatersDelta-Prep 3000色譜儀上完成，兩個C-18柱串聯(lián)(250×20mm，15μ，Vydac)。溶劑系統(tǒng)是0.1％TFA至60％乙腈/40％TFA(0.1％)，梯度洗脫30分鐘，流速20ml/分鐘，紫外光檢測，波長220nm。各組份的純度分析采用分析HPLC(梯度洗脫30分鐘，溶劑由100％TFA(0.1％)改變至100％乙腈，流速1ml/分鐘，波長214nm；保留時間Rt＝17.06分)和毛細(xì)管層電泳法。純凈組份(＞95％)合并，凍干后得到82mg(36％)絮樣白色粉末狀標(biāo)題多肽。
AAAThr0.95(1)，Glx1.04(1)，Gly1.04(1)，Val0.74(1)，Ile0.99(1)，Leu2.11(2)，Tyr1.01(1)，Phe1.01(1)，Lys1.03(1)，Arg1.05(1).FAB-MS(M＋H)+計(jì)算值1641，測定值1641.
實(shí)施例3[1-N，N-二甲基苯丙氨酸、13-亮氨酸]胃動素-(1-14)-肽酰胺(豬)二(三氟醋酸)鹽(Me2N)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Gln-NH2該多肽以0.2毫摩爾規(guī)模在NovaSynPR500樹脂上采用固相連續(xù)沖洗技術(shù)在9050型MilliGen肽合成儀上合成。在HOBt存在下所有殘基均作為Fmoc氨基酸的Pfp酯偶聯(lián)。只有Thr例外，它是作為ODhbt酯偶聯(lián)。側(cè)鏈保護(hù)如下Arg(Mtr)、Gln(Trt)、Glu(OtBu)、Tyr(tBu)、Thr(tBu)。在DMF中用于偶聯(lián)的Fmoc氨基酸OPfp/HOBt過量四倍摩爾。偶聯(lián)效率采用Kaiser測定來監(jiān)測。偶聯(lián)時間為1-4小時。在每個偶聯(lián)周期完成之后，用含有20％哌啶的DMF除去Fmoc-α-氨基保護(hù)基。合成之后，用DCM沖洗樹脂鍵合的肽并真空干燥過夜。將含有合成好的肽的樹脂移至盛有20ml NMP的燒瓶中，然后向此懸液中順序加入5ml 37％的甲醛水溶液(300當(dāng)量)，126mg氰基硼氫化鈉(10當(dāng)量)和200μl冰醋酸。將混合物攪拌7小時，樹脂濾出后用DMF(5×50ml)和DCM(5×50ml)沖洗并真空干燥。與含有5％苯硫基甲烷、3％乙二硫醇和2％苯甲醚的無水TFA(共20ml)在室溫下一起振蕩8小時，使肽去保護(hù)并裂解與樹脂脫離。然后將裂解的溶液滴入250ml的冷乙醚中，過濾收集沉淀的肽，得到白色粉末狀標(biāo)題多肽。該肽的純化采用高效液相色譜(HPLC)分三次(典型加樣量＝70mg/次)在Waters Delta-Prep 3000色譜儀上完成，兩個C-18柱串聯(lián)(250×20mm，15μ，Vydac)。溶劑系統(tǒng)是0.1％ TFA至60％乙腈/40％ TFA(0.1％)，梯度洗脫30分鐘，流速20ml/每分鐘，用紫外光檢測，波長220nm。純凈組份(＞95％)合并，凍干后得到111mg絮樣白色粉末狀標(biāo)題多肽。
AAAThr0.84(1)，Glx2.88(3)，Pro1.03(1)，Gly1.04(1)，Val0.47(1)，Ile0.87(1)，Leu1.88(2)，Tyr0.90(1)，Phe0.97(1)，Arg0.86(1).FAB-MS(M＋H)+計(jì)算值1738，測定值1738.
實(shí)施例4[1-N，N，N-三甲基苯丙氨酸、13-亮氨酸]胃動素-(1-14)-肽(豬)雙三氟醋酸鹽(Me3N+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Gln-OH該多肽以0.2毫摩爾規(guī)模在FMOC-L-Gln-(Mbh)PepSynKA樹脂上采用固相連續(xù)沖洗技術(shù)在9050型MilliGen肽合成儀上合成。在HOBt存在下，所有殘基均作為Fmoc氨基酸的Pfp酯偶聯(lián)。只有Thr除外，是ODhbt酯。側(cè)鏈保護(hù)如下Arg(Mtr)、Gln(Trt)、Glu(OtBu)、Tyr(tBu)和Thr(tBu)。在DMF中用于偶聯(lián)的Fmoc氨基酸OPfp/HOBt過量四倍摩爾。偶聯(lián)效率用Kaiser試驗(yàn)來監(jiān)測。偶聯(lián)時間為1-4小時。在每個偶聯(lián)周期完成之后，用含有20％哌啶的DMF除去Fmoc-α-氨基保護(hù)基。合成之后，用DCM沖洗樹脂鍵合的肽，并真空干燥過夜。將含有合成好的肽的樹脂移至盛有20ml DMF的燒瓶中，向此懸液中加入5ml碘代甲烷(400當(dāng)量)，再加入500mg碳酸鉀(18當(dāng)量)，將混合物攪拌12小時。樹脂濾出后用DMF(5×50ml)、水(2×25ml)和DMF(5×50ml)沖洗，真空干燥。加入含有5％苯硫基甲烷、3％乙二硫醇和2％苯甲醚的無水TFA(共20ml)，在室溫下振蕩8小時使肽去保護(hù)并裂解脫離樹脂。然后將裂解的溶液滴入250ml的冷乙醚中，過濾收集沉淀的肽，得到白色粉末狀標(biāo)題多肽。該肽的純化采用高效液相色譜(HPLC)分三次(典型加樣量＝70mg/次)在Waters Delta-Prep 3000色譜儀上完成，兩個C-18柱串聯(lián)(250×20mm，15μ，Vydac)。溶劑系統(tǒng)是0.1％TFA至60％乙腈/40％TFA(0.1％)，梯度洗脫30分鐘，流速20ml/分鐘，用紫外光檢測，波長220nm。純凈組份(＞95％)合并，凍干后得到71mg絮狀白色粉末的標(biāo)題多肽。
AAAThr0.88(1)，Glx3.25(3)，Pro1.00(1)，Gly1.00(1)，Val0.30(1)，Ile1.01(1)，Leu2.30(2)，Tyr1.10(1)，Phe1.10(1)，Arg1.10(1).FAB-MS(M＋H)+計(jì)算值1753，測定值1753.
實(shí)施例5在2％豬腎組織勻漿中體外穩(wěn)定性試驗(yàn)像大多數(shù)短直鏈多肽一樣，一般認(rèn)為胃動素是由腎刷狀緣細(xì)胞代謝的，因此選用腎組織勻漿作為模型系統(tǒng)來評價本發(fā)明肽的體外相對生物穩(wěn)定性。所有待測定的肽均在25℃與豬腎組織作用(PelFreeze，Inc.，Rogers，Arkansas)(2％w/v；最終保積＝4ml；緩沖液＝HEPES pH 7.0)。初始底物濃度和內(nèi)標(biāo)(Fmoc-Gly)濃度均為0.5mg/ml。為確定適當(dāng)?shù)淖饔脮r間和抽樣間隔，每一多肽均進(jìn)行兩次實(shí)驗(yàn)，第一次作為肽穩(wěn)定性的粗略估計(jì)值。所有樣本都是雙份的，樣本體積為180μl。
加入20μl 100％TCA(最終體積＝200μl；TCA最終濃度＝10％)凈化樣本。樣本充分?jǐn)嚢?至10秒鐘以保證作用均衡，然后離心棄去沉淀蛋白。用Waters高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分析，采用WISP微量注射器、5μ Vydac C-18分析柱和紫外檢測器，波長為214nm。注射體積80μl。初始溶劑條件為80％乙腈/20％(0.1％)TFA Milli-Q水溶液，經(jīng)35分鐘梯度洗脫，最終變?yōu)?3％乙腈/37％(0.1％)TFA，流速為1ml/分鐘。
分別計(jì)算多肽底物和代謝物與內(nèi)標(biāo)的峰比值，雙份樣本的比值平均。肽底物的平均比值用百分?jǐn)?shù)表示并且相對于時間做圖。數(shù)據(jù)處理采用一級動力學(xué)假設(shè)。底物消失的速率用Enzfitter程序(Biosoft)計(jì)算。相對半衰期由關(guān)系式t1/2＝0.693/k來確定。
實(shí)施例6胃動素受體結(jié)合親和性測定本發(fā)明肽的胃動素受體結(jié)合親和性采用[Bormans，Peeters和Vantrappen，Regul.Pept.，15，143-153(1986)]的通用方法來測定。本發(fā)明的肽置換結(jié)合在兔胃竇平滑肌細(xì)胞膜上的[125I-Tyr7，Nle13]胃動素(豬)的能力進(jìn)行兩次測定，每次都測定雙份樣本，濃度為10-11至10-4M。采用數(shù)據(jù)與置換方程擬合的方法來確定置換50％標(biāo)記時的濃度(IC50)，其假設(shè)是胃動素受體種類單一，標(biāo)記和未標(biāo)記胃動素與其結(jié)合具有同等的親和性而且無協(xié)同作用。擬合是采用SAS軟件包(美國，北卡羅來納，Cary公司，SAS研究所)中迭代中最小二乘法程序。從大量的對照實(shí)驗(yàn)中求得胃動素本身的離解常數(shù)為0.75nM(pKd＝9.12)，這一數(shù)值用于所有的計(jì)算。置換50％標(biāo)記時的濃度用其負(fù)對數(shù)(pIC50)來表示。
實(shí)施例7兔十二指腸平滑肌束組織浴實(shí)驗(yàn)按照[Depoortere et al.，J.Gastrointestinal Motility，1，150-159(1989)]的方法，采用等滲組織浴測定兔十二指腸部分的收縮反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括1小時平衡階段；10-4M乙酰膽鹼。刺激然后清洗；在末期加入10-7M胃動素后，化合物在累積劑量-反應(yīng)曲線；最后是10-4M乙酰膽鹼。如果對于10-4M乙酰膽鹼的最終反應(yīng)與最初反應(yīng)相差超過5％。結(jié)果棄去?；衔锝?jīng)測定濃度為10-11－10-4M。用數(shù)據(jù)擬合方程E＝Emax(1＋EC50/[L])來確定相應(yīng)于對胃動素最大反應(yīng)(Emax)50％的點(diǎn)。對于活性低的化合物可用對10-7M胃動素反應(yīng)的90％作為Emax。產(chǎn)生50％反應(yīng)的劑量用其負(fù)對數(shù)(pEC50)來表示。
實(shí)施例8狗胃腸道收縮活性雜種狗不論何性別均用65mg/kg的戊巴比妥鈉靜脈注射麻醉。沿中線切開腹部。確定十二指腸部位的位置，找出該部位的末梢動脈，將盡可能接近末梢的適當(dāng)直徑的動脈擦去脂肪和筋膜。將適當(dāng)直徑的針頭折成一定角度并插入已清除脂肪和筋膜的動脈。針頭在動脈內(nèi)位置固定約30秒鐘，直至血管痙攣解除，然后將導(dǎo)管裝置插入動脈并用零號絲線結(jié)扎固定位置。將聚乙烯細(xì)導(dǎo)管(10-15cm)在一端截斷并將針頭插入另一端。將針頭的尾部插在一個三通活塞上，導(dǎo)管裝置內(nèi)注入含有10mM葡萄糖的肝素Krebs Ringer碳酸氫鹽。將Krebs(無空氣)一次性注入動脈導(dǎo)管并注意觀察蒼白區(qū)在該部位的分布。如果蒼白區(qū)域過大，可結(jié)扎側(cè)支動脈，但要維持該區(qū)域的循環(huán)。然后將Bass型張力計(jì)縫合到漿膜上并調(diào)整方向以便用Beckman R611達(dá)因儀記錄環(huán)形肌的收縮。將銀線電極插入張力計(jì)兩側(cè)的漿膜下并通過絕緣刺激裝置與Grass S88電刺激器相連。采用電場刺激，40V，0.5ms 5pps，記錄筆振幅調(diào)整至能顯示收縮反應(yīng)。
所有待注入的肽均溶解于Krebs中并制備一系列的稀釋液，目的是采用任何濃度其最大注射體積均為1ml。除貯存的Krebs之外，在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天所有溶液均在冰上放置，當(dāng)天實(shí)驗(yàn)結(jié)束時棄之。為了測出劑量-反應(yīng)曲線，同一部位首先用約1ml肝素Krebs一次性注入作為平行對照。注入的肽興奮劑(體積均為1ml，Krebs平行對照也是1ml)按對數(shù)增長，直至出現(xiàn)最大振幅的反應(yīng)。然后用含有0.1％BSA的Krebs沖洗注入部位以清除殘留在動脈系統(tǒng)內(nèi)的肽。由于肽是作用于胃動素受體的，所以要注意注入劑量不能超過次最大量，否則會導(dǎo)致快速減敏。因此當(dāng)出現(xiàn)明顯的反應(yīng)時，要采用0.3或0.5個對數(shù)單位增長。一個部位只能每0.5-1小時進(jìn)行一次劑量-反應(yīng)測定。
測量各部位對電場刺激的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)的振幅，作為該部位的100％。測定本發(fā)明興奮劑各個劑量的反應(yīng)的振幅，換算成標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)的百分?jǐn)?shù)，相對于濃度作圖。反應(yīng)的ED50表示出現(xiàn)的反應(yīng)等于標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)的50％時所需的興奮劑的量。它反映了反應(yīng)的效力和能力，但兩者又不能明確區(qū)分。
表1在結(jié)合實(shí)驗(yàn)和收縮性實(shí)驗(yàn)中胃動素受體興奮劑的效力化合物 pEC50pIC50
表1(續(xù))在結(jié)合實(shí)驗(yàn)和收縮性實(shí)驗(yàn)中胃動素受體興奮劑的效力化合物 pEC5OpIC50
表1(續(xù))在結(jié)合實(shí)驗(yàn)和收縮性實(shí)驗(yàn)中胃動素受體興奮劑的效力化合物
<p>表1(續(xù))在結(jié)合實(shí)驗(yàn)和收縮性實(shí)驗(yàn)中胃動素受體興奮劑的效力化合物 pEC50pIC50
*pMOT＝豬胃動素表2在2％豬腎組織勻漿中胃動素受體興奮劑的半衰期化合物 T％
<p>表3在狗胃腸道中胃動素受體興奮劑的效力化合物ED50*<
<p>表3(續(xù))在狗胃腸道中胃動素受體興奮劑的效力化合物 ED50
ED50用毫微摩爾表示盡管本發(fā)明已經(jīng)介紹了許多本發(fā)明的實(shí)施例，但顯而易見只要不違反本發(fā)明的根本原則，不超出本發(fā)明的范圍，可以改變本發(fā)明的基本構(gòu)思提供利用本發(fā)明的其它實(shí)施例而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。所有這些修改和變動均包括在懸而未決的權(quán)利要求書中限定的本發(fā)明范圍之內(nèi)，并不局限于以實(shí)例方式給出的特定實(shí)施例。
權(quán)利要求
1.下式的具有胃腸運(yùn)動刺激活性的多肽，包括其光學(xué)活性異構(gòu)體和可藥用的酸加成鹽 其中A是親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體；B是L-脯氨酸和L-丙氨酸；D是親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體；E是芳香族、親脂的脂肪族或脂環(huán)族氨基酸的L-型立體異構(gòu)體；F是芳香族或雜環(huán)氨基酸的L-型立體異構(gòu)體；G是甘氨酸或D-丙氨酸；H是L-谷氨酸或L-谷氨酰胺；I是L-谷氨酰胺、L-谷氨酸或L-丙氨酸；J是I和基團(tuán)-NH-之間的一個化學(xué)鍵，或選自以下基團(tuán)中的一個基團(tuán)Z，Z-Leu，Z-Leu-Gln，Z-Leu-Gln-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys，和Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly，其中Z選自精氨酸、D-精氨酸、D-高精氨酸、D-賴氨酸、D-鳥氨酸、D-2，4-二氨基丁酸、D-谷氨酰胺、D-天冬酰胺和D-丙氨酸；R1是低級烷基或烯丙基；R2選自氫、低級烷基、炔丙基和烯丙基；R3選自氫、低級烷基和烯丙基；R4選自低級烷基、環(huán)烷基、取代或未取代的芳基和雜芳基，其中芳基可以被選自鹵素、羥基和低級烷氧基的一個或多個取代基所取代；R5選自-CH2CONH2、含有1-3個碳原子的氨基烷基、和含有2或3個碳原子的胍基烷基；R6是-COOH或-CONH2；m是數(shù)字0或1，星號表示可以是D或L構(gòu)型的不對稱碳原子，每個低級烷基含有1-4個碳原子，前提是(a)當(dāng)m為0時，R2和R3是氫，J是一化學(xué)鍵，-NH-*CH(CH2R5)R6基團(tuán)具有D-構(gòu)型；(b)只有當(dāng)J是Z-Leu或Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly時，R5才是-CH2CONH2；(c)當(dāng)m為0時，R2和R3是氫，J是Z，Z-Leu，Z-Leu-Gln，Z-Leu-Gln-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys，和Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly，其中Z具有D構(gòu)型；和(d)該多肽不是胃動素。
2.權(quán)利要求1的多肽，其中(R1)m(R2)(R3)N-*CH(CH2R4)CO-選自L-苯丙氨酸、D-苯丙氨酸、L-環(huán)己基丙氨酸和D-環(huán)己基丙氨酸。
3.權(quán)利要求1的多肽，其中A選自L-纈氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸；L-正纈氨酸、L-正亮氨酸和L-環(huán)己基丙氨酸。
4.權(quán)利要求1的多肽，其中D選自L-異亮氨酸、L-纈氨酸、L-亮氨酸、L-正纈氨酸、L-正亮氨酸和L-環(huán)己基丙氨酸。
5.權(quán)利要求1的多肽，其中E選自苯丙氨酸、對-氟苯丙氨酸、對-氯苯丙氨酸、對-溴苯丙氨酸、對-碘苯丙氨酸、酪氨酸、對-甲氧基苯丙氨酸、1-萘丙氨酸、2-萘丙氨酸、亮氨酸和環(huán)己基丙氨酸。
6.權(quán)利要求1的多肽，其中F選自酪氨酸、苯丙氨酸、對-甲氧基苯丙氨酸、組氨酸、色氨酸、β-2-噻吩丙氨酸和β-3-吡啶丙氨酸。
7.權(quán)利要求1的多肽，其中J是I和-NH-基團(tuán)之間的一個化學(xué)鍵，或者選自Z-Leu，Z-Leu-Gln，Z-Leu-Gln-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn，Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys，和Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly，其中Z選自精氨酸、D-精氨酸和D-谷氨酰胺。
8.權(quán)利要求1的多肽，其中R4選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、環(huán)己基、苯基、對-氟苯基、對-氯苯基、對-溴苯基、對-碘苯基、對-羥基苯基、對-甲氧基苯基、1-萘基、2-萘基、3-吲哚基、2-噻吩基和3-吡啶基。
9.權(quán)利要求1的多肽，其中R5選自-CH2CONH2和含有1-3個碳原子的氨基烷基。
10.權(quán)利要求1的多肽，其中基團(tuán)-NH*CH(CH2R5)-R5是選自精氨酸、D-精氨酸、賴氨酸、D-賴氨酸、谷氨酰胺、D-谷氨酰胺、D-鳥氨酸、D-2，4-二氨基丁酸和D-高精氨酸的基團(tuán)。
全文摘要
本發(fā)明提供了下式的具有胃腸道運(yùn)動刺激活性的多肽，式中各符號的定義同說明書。
文檔編號A61P3/00GK1119650SQ9411502
公開日1996年4月3日 申請日期1994年8月5日 優(yōu)先權(quán)日1993年8月6日
發(fā)明者M·J·馬西拉格, R·達(dá)蘭尼普拉加達(dá), J·R·佛羅倫斯, M·S·馬溫, A·加爾迪斯 申請人:奧梅達(dá)藥品部門有限公司