專利名稱：：一種含有脂肪酶的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及脂肪酶，尤其涉及一種含有脂肪酶的組合物。
背景技術(shù)：
：脂肪肝是指由于各種原因引起.的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積過多的病變。脂肪性肝病正嚴(yán)重威脅人類的健康，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公認(rèn)為隱蔽性肝硬化的常見原因。脂肪肝是一種常見的臨床現(xiàn)象，而非一種獨(dú)立的疾病。其臨床表現(xiàn)輕者無癥狀，重者病情兇猛。一般而言，脂肪肝屬可逆性疾病，早期診斷并及時(shí)治療常可恢復(fù)正常。正常人的肝內(nèi)總脂量，約占肝重的5%,內(nèi)含磷脂、甘油三酯、脂酸、膽固醇及膽固醇脂。而患脂肪肝者，總脂量可達(dá)40%-50%,主要是甘油三酯及脂酸，而磷脂、膽固醇及膽固醇脂只少量增加。脂肪肝一般分為兩大類，一類是酒精性脂肪肝，這類患者中只有少部分人可能出現(xiàn)血脂增高。另一類是非酒精性脂肪肝，其原因比較復(fù)雜，包括肥胖、糖尿病、高血脂、藥物及遺傳因素等，還有40%左右原因不明的脂肪肝。目前NAFLD藥物治療方法主要有1)去脂藥物治療，如力平脂、易善復(fù)、辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、甘糖酯、銀杏葉片、脂必妥、降脂靈等；降脂藥容易導(dǎo)致ALT增高。2)保肝藥物治療，保肝藥物種類繁多，主要有促進(jìn)肝細(xì)胞再生、協(xié)助肝細(xì)胞解毒、祛除肝內(nèi)過多脂肪和改善肝組織代謝等作用。多數(shù)藥物缺乏嚴(yán)格的雙盲試驗(yàn)，難以評估其確切療效；而且這些藥物通過肝臟代謝，加重了肝功能損害。3)中醫(yī)中藥治療脂肪肝，一般根據(jù)主證進(jìn)行辨證施治，以減輕癥狀。治療效果參差不齊，難以評估。
發(fā)明內(nèi)容3本發(fā)明的目的在于提供一種含有脂肪酶的組合物，其可用于治療/預(yù)防脂肪肝或高血脂。一種含有脂肪酶的組合物，該組合物包括以下重量份的組分脂肪酶5-9份、山楂提取物1-2份、枸杞子提取物1-2份。所述組合物還包括以下重量份的組分制首烏提取物l-2份、決明子提取物1-2份、大黃提取物1-2份。所述組合物還包括以下重量份的組分肌醇0.1-0.3份。所述脂肪酶來源于微生物。所述脂肪酶來源于黑曲霉菌、根霉菌、鐮刀霉菌、地霉菌、假絲酵母菌、擴(kuò)展青霉菌或圓弧青霉菌。所述脂肪酶的酶活為2000-4000u/g。所述脂肪酶的酶活為3100u/g。山楂其性微溫味酸甘。李時(shí)珍在《本草綱目》中說"化飲食，消肉積......消滯血脹痛。，，現(xiàn)代藥理研究證明，山楂能增強(qiáng)心肌收縮力，增加心輸出量，減慢心率，擴(kuò)張冠狀血管，具有降血壓、降血脂等作用。且藥性平和，久食亦無副作用。枸杞子味甘，性平。具有保肝、護(hù)肝作用。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為能補(bǔ)肝陰、養(yǎng)肝血、益精明目?，F(xiàn)代藥理研究證明枸杞子能降血糖，抑制脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉積，促進(jìn)肝細(xì)胞新生，并有降壓功效。制首烏何首烏經(jīng)加工制熟稱為制首烏。制首烏性溫，味甘苦。《開寶本草》說"首烏益氣血、黑髭愛、悅顏色，久服壯筋骨、益精髓，延年不老。"歷代中醫(yī)學(xué)家都認(rèn)為制首烏是一味補(bǔ)益強(qiáng)身、延年益壽的良藥。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，首烏具有降血脂、降血糖、軟化血管和降壓的功效。決明子又名草決明，因其有明目之功，故又有"千里光，，和"還瞳子"的美稱。其性微寒，味甘苦。炒熟用。具有清肝明目、養(yǎng)陰清熱、潤腸通便的功效?，F(xiàn)代研究證明，決明子水浸劑和乙醇浸劑有降壓、降脂和通便的作用。大黃是一味瀉卞通便、清熱解毒的良藥，一般都用于急性熱病木4便秘結(jié)。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，其除有瀉下通便作用外，還有降血壓、降膽固醇作用。小劑量則有健胃作用。小量常服，對肥胖病、高血壓、冠心病、高血脂患者，均有良好的作用。本發(fā)明所述一種含有脂肪酶的組合物，其口服或非口服給藥均是安全的。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑、膠嚢劑、丸劑、滴丸、口腔含片等，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其他液體制劑如糖漿、酏劑等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成靜脈注射或肌肉注射用的溶液、水或油性懸浮劑等。本發(fā)明所述一種含有脂肪酶的組合物，與其藥學(xué)上可接受的載體一起構(gòu)成用于治療/預(yù)防脂肪肝的藥物，該載體可以是藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如稀釋劑、賦形劑如水等，填充劑如淀粉、庶糖等；黏合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氬釣；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸收載體如高嶺土和皂黏土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈉和鎂、聚乙二醇等。另外還可以在組合物中加入其他輔劑如香味劑、甜味劑等。本發(fā)明所述含有脂肪酶的組合物可以有效治療/預(yù)防脂肪肝或者高血脂，尤其是非酒精性脂肪肝。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1一種含有脂肪酶的組合物，包括以下重量份的組分脂肪酶6份、山楂提取物1.5份、枸杞子提取物1.5份。實(shí)施例2一種含有脂肪酶的組合物，包括以下重量份的組分脂肪酶9份、山楂提取物2份、枸杞子提取物l份、制首烏提取物l份、決明子提取物1份、大黃提取物l份。實(shí)施例3一種含有脂肪酶的組合物，包括以下重量份的組分脂肪酶5份、山楂提取物l份、枸杞子提取物l份、制首烏提取物l份、決明子提取物1份、大黃提取物l份。實(shí)施例4一種含有脂肪酶的組合物，包括以下重量份的組分脂肪酶7份、山楂提取物1.5份、枸杞子提取物1.5份、肌醇0.15份。試驗(yàn)例實(shí)施例1所述一種含有脂肪酶的組合物對非酒精性脂肪肝的防治作用。一、實(shí)驗(yàn)材料1.1高脂飼料自制，配方為2%膽固醇，10%豬油，0.2%膽酸鈉，5%蛋黃粉，82.8%基礎(chǔ)飼料。膽固醇湖南祁東同信生化廠生產(chǎn)，批號071226豬油市售^1油熬制。蛋黃粉市售雞蛋自制。膽酸鈉湖南祁東同信生化廠生產(chǎn)，批號071109。基礎(chǔ)飼料南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。1.2測定試劑TC測定試劑盒中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)。批號080171。TG測定試劑盒中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號080201。HDL-C測定試劑盒浙江東歐生物工程有限公司生產(chǎn)，批號08060579。1.3乙醚天津市天河化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號20070812。1.4實(shí)—驗(yàn)動物Wistar大鼠(SPF級)，雄性，體重160-180(g)。南方醫(yī)科大學(xué)6實(shí)-瞼動物中心4是供，動物合才各證2006A052。1.5實(shí)驗(yàn)儀器全自動生化測定儀OlympusAV-640型，日本產(chǎn)。切片機(jī)LEICARM2245。二、實(shí)3全動物Wistar大鼠55只，雄性，體重160-180g,SPF級，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證2006A052。飼養(yǎng)在中央空調(diào)的觀察室(粵監(jiān)證字2007C083號，符合屏障級標(biāo)準(zhǔn))中，溫度24.0土1.(TC，照明時(shí)間12小時(shí)。三、受試藥物實(shí)施例1所述含有脂肪酶的組合物，其中脂肪酶酶活3100u/g。藥物配制電子天平稱取適量組合物，用1。/。CMC-Na稀釋成0.52g/ml、0.26g/ml、0.13g/ml。給藥體積lml/100g體重。四、方法1、試驗(yàn)方法取Wistar雄性大鼠70只，乙醚麻醉，眼眶靜脈叢取血，離心分離血清，用OlympusAV-640型全自動生化儀測定TC、TG含量，剔除數(shù)值異常的大鼠。選取合格大鼠55只，按TC、TG含量水平，隨機(jī)分為5組，每組11只，即(1)正常對照組；(2)模型對照組，灌胃給予0.5%CMC-Na;(3)-(5)給藥組，脂肪酶劑量分別為8060u/kg(相當(dāng)于人擬臨床等效用量2倍)、4030u/kg(相當(dāng)于人擬臨床等效劑量)、2015u/kg(相當(dāng)于人擬臨床等效劑量的0.5倍)。受試藥用前分別用0.5。/。CMC-Na研磨、配成所需濃度，給藥體積均為lml/100g體重。給藥當(dāng)天，除正常對照組喂飼普通飼料外，其它各組改為高脂飼料。在試驗(yàn)期間觀察動物狀態(tài)，每周記錄體重1次，并于造模給藥后12周，將動物禁食不禁水16小時(shí)后，用乙醚麻醉，眼眶靜脈叢取血約2ml，3000r離心10分鐘，取血清，于全自動生化分析儀上測定血清中的TG、TC、HDL-C含量，并計(jì)算TC/HDL-C比值。處死所有動物，摘取肝臟并稱重。觀察大體肝臟外觀后，用10%曱醛固定肝組織，進(jìn)行病理學(xué)檢查，結(jié)果見表l匿3。2、觀察指標(biāo)及評定標(biāo)準(zhǔn)全自動生化分析儀^r測血清TG、TC、HDL-C含量。肝臟病理學(xué)檢查肝組織進(jìn)行石蠟包埋、切片、常規(guī)HE染色后，脂肪病理組織學(xué)診斷參考中華醫(yī)學(xué)會肝臟病學(xué)分會脂肪肝非酒精性肝病學(xué)組"非酒精性脂肪肝診斷標(biāo)準(zhǔn)"1，同時(shí)根據(jù)肝小葉內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)對脂肪肝程度進(jìn)行分級2肝細(xì)胞內(nèi)無脂滴沉積為0分、肝小葉內(nèi)<30%的肝細(xì)胞有脂肪變?yōu)閘分、肝小葉內(nèi)30%-50%的肝細(xì)胞有脂肪變?yōu)?分、肝小葉內(nèi)50%-75%的肝細(xì)胞有脂肪變?yōu)?分、肝小葉內(nèi)75%以上的肝細(xì)胞有脂肪變?yōu)?分。3、統(tǒng)計(jì)方法釆用SPSS14.0軟件包進(jìn)行分析，所有結(jié)果均已計(jì)算機(jī)直接輸出。計(jì)量資料以(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，各組間比較采用單因素方差分析LSD法。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，P值小于或等于0.05被認(rèn)為所檢驗(yàn)的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。五、試驗(yàn)結(jié)果1、一般觀察正常組和模型組大鼠體重增加較大，但脂肪酶高、中劑量組體重比模型組比較明顯降低(p<0.05)2、脂肪酶對脂代謝紊亂大鼠體重及肝重指數(shù)的影響表1.脂肪酶對脂代謝紊亂大鼠體重及肝重指數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2009模型組與對照組比較AApO.01;纟會藥組與才莫型iE比4交*p<0.05**p<0.013、含有脂肪酶的組合物對大鼠脂代謝紊亂TG含量、TC含量、HDL-C含量、TC/HDL-C比值的影響表2.含有脂肪酶的組合物對大鼠脂代謝紊亂TG含量、TC含量、HDL-C含量、TC/HDL-C比值的影響分組劑量TGTCHDL-CTC/HDL-C比值正常對照組—0.71±0.151.53±0.200.93±0.101.65±0.08模型組—1.16土0.50"3.28土0.63"0.75±0.06A4.27±0.87"給藥組80600.88±0.24*2.57±0.52**0.62±0.07**4.15±0.80給藥組40300.77±0.24*2.51±0.54**0.64土0.07"3.98±0.82給藥組20150.77±0.36*2.58±0.44**0.66±0.12**3.95±0.50模型組與正常對照組比較ApO.05;△ApO.Ol給藥組與模型組比較*p<0.05;**p<0.014、肝臟病理學(xué)改變4.1大體觀察12周末，正常對照大鼠肝臟顏色鮮紅，邊緣銳利，質(zhì)軟，表面光滑。模型組大鼠肝臟增大，色黃，邊緣變鈍，質(zhì)脆，切面有油膩感。給藥組大鼠肝臟體積較正常組明顯增大，但比模型組明顯減小，色黃，邊緣變鈍，質(zhì)脆，切面有油膩感。4.2光鏡觀察正常對照大鼠肝組織切片HE染色顯示肝組織無明顯脂肪沉積。模型組大鼠肝組織切片HE染色顯示大部分大鼠肝組織50-75%細(xì)胞呈明顯脂肪變性。給藥組大鼠肝組織切片HE染色顯示肝組織細(xì)胞呈明顯脂肪變性的程度與模型組比較明顯減少。脂肪變性程度計(jì)分見表3.表3含有脂肪酶的組合物對大鼠肝組織HE染色肝細(xì)胞脂肪變性的影響分組劑量動物數(shù)脂肪變性程度計(jì)分正常對照組一12o.oo土o.oo模型組一123.17±0.944A9給藥組8060121.92±0.49=^給藥組4030121.58±0.51**給藥組2015122.42±0.67*模型組與正常對照組比較AApO.Ol給藥組與模型組比較*p<0.05;**p<0.01六、試3全結(jié)i侖上述結(jié)果表明，造模組Wistar大鼠在造模后體重增長緩慢，食量減少，動物狀態(tài)明顯不佳，消瘦、毛松，體重下降明顯。給藥組動物狀態(tài)好于模型組，各劑量組能明顯降低肝重指數(shù)(見表l)。造模12周時(shí)，模型組動物血清TC、TG含量和TC/LDL-CH比值均明顯高于正常對照組(p<0.05或p<0.01),且病理檢查表明，模型組動物肝組織脂肪變性成立，表明血脂紊亂型脂肪肝模型已形成。給藥組各劑量組對TG、TC有明顯抑制作用(見表2)，但對TC/LDL-CH無影響。脂肪酶對大鼠肝組織HE染色肝細(xì)胞脂肪變性程度計(jì)分見表3,表明含有脂肪酶的組合物可明顯改善由高脂飼料引起的動物肝臟的脂肪變性。綜上所述，在本試驗(yàn)條件下，受試物品含有脂肪酶的組合物能明顯降低肝重指數(shù)，雖對TC/LDL-CH比值無影響，但能抑制動物血清TC、TG含量，還能顯著改善肝臟脂肪沉積。說明該組合物不僅對血脂代謝紊亂有明顯改善，還具有使肝臟的脂肪沉積明顯減少、降低肝臟脂肪變性的作用。用實(shí)施例2、3或4所述含有脂肪酶的組合物飼喂大鼠得到與試驗(yàn)例1相似結(jié)果，含有脂肪酶的組合物能明顯降低肝重指數(shù)，雖對TC/LDL-CH比值無影響，但能抑制動物血清TC、TG含量，還能顯著改善肝臟脂肪沉積。說明該組合物不僅對血脂代謝紊亂有明顯改善，還具有使肝臟的脂肪沉積明顯減少、降低肝臟脂肪變性的作用。權(quán)利要求1、一種含有脂肪酶的組合物，其特征在于，該組合物包括以下重量份的組分脂肪酶5-9份、山楂提取物1-2份、枸杞子提取物1-2份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含有脂肪酶的組合物，其特征在于，所述組合物還包括以下重量份的組分制首烏提取物l-2份、決明子提取物1-2份、大黃提取物1-2份。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含有脂肪酶的組合物，其特征在于，所述組合物還包括以下重量份的組分肌醇0.1-0.3份。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述一種含有脂肪酶的組合物，其特征在于所述脂肪酶來源于微生物。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種含有脂肪酶的組合物，其特征在于所述脂肪酶來源于黑曲霉菌、根霉菌、鐮刀霉菌、地霉菌、假絲酵母菌、擴(kuò)展青霉菌或圓弧青霉菌。6、根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述一種含有脂肪酶的組合物，其特征在于，所述脂肪酶的酶活為2000-4000u/g。7、根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述一種含有脂肪酶的組合物，其特征在于，所述脂肪酶的酶活為3100u/g。全文摘要本發(fā)明涉及脂肪酶，公開了一種含有脂肪酶的組合物，該組合物包括以下重量份的組分脂肪酶5-9份、山楂提取物1-2份、枸杞子提取物1-2份。其可用于治療或預(yù)防脂肪肝或高血脂，尤其是非酒精性脂肪肝。文檔編號A61K31/045GK101518646SQ200910106279公開日2009年9月2日申請日期2009年4月2日優(yōu)先權(quán)日2009年4月2日發(fā)明者張清輝,王劍英申請人:深圳市綠微康生物工程有限公司