專(zhuān)利名稱(chēng)：延遲釋放組合物及組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合物及組合，其含有有效量的生物活性蛋白質(zhì)，其量足以延遲該生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白膠，或血纖維蛋白原及凝血酶。
背景技術(shù)：
畜牧業(yè)多盡可能避免對(duì)所飼養(yǎng)的動(dòng)物進(jìn)行注射，其目的在于降低對(duì)所飼動(dòng)物產(chǎn)生應(yīng)激的可能性，并同時(shí)減少飼養(yǎng)的人力成本。一般的豬自離乳至上市販?zhǔn)矍暗钠陂g內(nèi)，畜牧業(yè)者通常僅對(duì)其進(jìn)行至多兩次的注射。
然而，為使所飼動(dòng)物維持良好的生長(zhǎng)狀態(tài)甚或可進(jìn)一步促進(jìn)其生長(zhǎng)，業(yè)者又可能需在其生長(zhǎng)過(guò)程中提供某些生理活性蛋白質(zhì)。例如，已知豬生長(zhǎng)激素可在特定時(shí)期刺激豬的生長(zhǎng)。據(jù)報(bào)導(dǎo)，重組豬生長(zhǎng)激素(rPST)可使豬提早約十天以上達(dá)到上市販?zhǔn)鬯璧陌俟矬w重，經(jīng)濟(jì)利益至為可觀。
不過(guò)，為達(dá)上述功效，業(yè)者必須在豬體重為約25公斤時(shí)開(kāi)始每日注射一次rPST，至其體重達(dá)約75公斤為止。每日注射所涉的人力成本至鉅，對(duì)豬而言又可能造成應(yīng)激，因此，阻礙了上述刺激豬生長(zhǎng)的方法的產(chǎn)業(yè)利用。
為兼顧飼養(yǎng)方式、成本及經(jīng)濟(jì)利益，本領(lǐng)域亟需可有效延長(zhǎng)生物活性蛋白質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)的有效劑量的方法，期使單劑注射即可達(dá)到該生物活性蛋白質(zhì)所可提供的最大功效。
血纖維蛋白膠(″fibringlue″)或稱(chēng)血纖維蛋白黏合劑(″fibrinsealant″)業(yè)為外科手術(shù)所使用多年，它是使血纖維蛋白原在凝血酶存在下轉(zhuǎn)化成血纖維蛋白，通過(guò)仿真動(dòng)物體凝血酶機(jī)制的最后步驟，而達(dá)到凝血酶、促進(jìn)傷口愈合等目的。請(qǐng)參考如The Journal ofLaryngology and Otology November 1987，Vol.101.pp.1182-1186；Br.J.Surg.1991，Vol.78，July，841-843；及Ann.Thorac Surg 199356387-9。
Exp Brain Res 1995104(2)199-206揭示，血纖維蛋白膠可延長(zhǎng)膠細(xì)胞系衍生化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織中的傳遞。此外，Biol.Pharm.Bull.20(3)278-281(1997)教示利用血纖維蛋白膠及其與藻酸鈉的組合物進(jìn)行羥道諾紅霉素的位置特異性傳遞，可延長(zhǎng)該藥品在腫瘤細(xì)胞胞外液體中的期間。再者，Cell Transplant 1998Jan-Feb；7(1)53-61則揭示一種含有血纖維蛋白膠-GDNF的緩釋制劑，據(jù)稱(chēng)血纖維蛋白膠可在特定期間內(nèi)使GDNF促限于施用的部位，而不進(jìn)入周?chē)w液或CSF循環(huán)中。
上述三文獻(xiàn)并未提示血纖維蛋白膠的全身性作用。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供一種延長(zhǎng)生物活性蛋白質(zhì)有效血中濃度的方法。進(jìn)一步，本發(fā)明提供一種生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合物及組合，該生物活性蛋白質(zhì)可于施用后，在動(dòng)物體內(nèi)維持延長(zhǎng)有效的血中濃度。
發(fā)明詳述現(xiàn)意外地發(fā)現(xiàn)，血纖維蛋白膠可使生物活性蛋白質(zhì)緩慢而規(guī)則地釋放，達(dá)到延長(zhǎng)該蛋白質(zhì)有效血中濃度而產(chǎn)生延長(zhǎng)的全身性作用的功效。
因此，本發(fā)明首先提供一種生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合物，其含有有效量的生物活性蛋白質(zhì)及其量足以延遲該生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白膠。
任何對(duì)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物有益的蛋白質(zhì)均適用于本發(fā)明，其包括但不限于生長(zhǎng)激素、胰島素、干擾素及胞激素。這些生物活性蛋白質(zhì)可為任何方法所制得，包括利用遺傳工程方式所制的重組蛋白質(zhì)，例如重組豬生長(zhǎng)激素(rPST)。
本發(fā)明組合物所含的生物活性蛋白質(zhì)的有效量，依不同的生物活性蛋白質(zhì)種類(lèi)及所希冀達(dá)成的效果而定，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可根據(jù)尋常技術(shù)而判定。例如，當(dāng)使用rPST為生物活性蛋白質(zhì)時(shí)，本發(fā)明組合物可含有約20-50毫克/毫升的rPST，較佳為約25毫克/毫升的rPST。
同樣地，足以延遲生物活性蛋白質(zhì)釋放的纖維蛋白膠的有效量，亦根據(jù)所使用蛋白質(zhì)的種類(lèi)及希冀達(dá)成的效果而定。大體而言，較優(yōu)選的，本發(fā)明組合物中含有相當(dāng)于使用30-60克血纖維蛋白原/毫升及10-100國(guó)際單位/毫升凝血酶所產(chǎn)生的血纖維蛋白膠。最佳為相當(dāng)于使用50毫克血纖維蛋白原/毫升及60國(guó)際單位/毫升凝血酶所產(chǎn)生的血纖維蛋白膠。
本發(fā)明組合物所含血纖維蛋白膠亦可于使用時(shí)原位形成，而達(dá)到延長(zhǎng)生物活性蛋白質(zhì)釋放的功效。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合，其含有有效量的生物活性蛋白質(zhì)，其量足以延遲該生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白原及凝血酶。
大體而言，本發(fā)明生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合所含成份個(gè)別含于分離的容器中，而于施用時(shí)在注射部位原位混合，形成延長(zhǎng)生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白膠?；蛘撸撋锘钚缘鞍踪|(zhì)與血纖維蛋白原預(yù)經(jīng)混合而置于同一容器中，凝血酶則含于另一分別的容器中，在施用時(shí)在注射部位與生物活性蛋白質(zhì)與血纖維蛋白原的混合物原位混合，形成延長(zhǎng)生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白膠。
本發(fā)明組合，不論其中血纖維蛋白原系單獨(dú)含于分別的容器中，或是預(yù)與生物活性蛋白質(zhì)混合，其較優(yōu)選含有30-60毫克的血纖維蛋白原/毫升，及10-100國(guó)際單位/毫升的凝血酶。最優(yōu)選含50毫克的血纖維蛋白原/毫升及60國(guó)際單位的凝血酶/毫升。
為輔助本發(fā)明延遲釋放組合在施用時(shí)于原位形成血纖維蛋白膠，本發(fā)明組合亦可含有第IIa族堿土金屬成份，如離子化鈣成份，例如氯化鈣。
本發(fā)明延遲釋放組合物或組合可延遲所含生物活性蛋白質(zhì)的釋放，使該生物活性蛋白質(zhì)在施用后維持較長(zhǎng)的有效血中濃度。較優(yōu)選的，本發(fā)明延遲釋放組合物或組合可延遲所含生物活性蛋白質(zhì)的釋放，使該生物活性蛋白質(zhì)于施用后能維持至少約21天的有效血中濃度。更優(yōu)選的為能維持約30天的有效血中濃度。
根據(jù)所含生物活性蛋白質(zhì)的不同，本發(fā)明延遲釋放組合物或組合可達(dá)到多種有益的功效。例如，當(dāng)該生物活性蛋白質(zhì)為生長(zhǎng)激素時(shí)，其可用以促進(jìn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的生長(zhǎng)，例如豬、牛、馬、駱駝、禽類(lèi)、魚(yú)、蝦等水產(chǎn)生物的生長(zhǎng)，降低飼料成本，并改良肉品品質(zhì)。
現(xiàn)以下述實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)例并非本發(fā)明的限制，任何本領(lǐng)域技術(shù)人員所推知的變化均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
實(shí)例一取重約200克的大鼠共30只，隨機(jī)分成三組試驗(yàn)組(FG+pST)、血纖維膠對(duì)照組(FG)及每日注射對(duì)照組(DI)。
于試驗(yàn)第1天，以100微升的溶液A注射試驗(yàn)組(FG+pST)的大鼠，其含有10毫克的血纖維蛋白原及110微克的pST，包含在80微升Hanks緩沖液及20微升(100KIU)牛肺臟抑蛋白酶(aprotinin)中，接著立即在同一部位注射100微升的溶液B，其含有40mM的CaCl2及4.9-11.1毫克/毫升的凝血酶。飼養(yǎng)共21天，于第14及21天稱(chēng)重。
于試驗(yàn)第1天，以100微升的溶液A注射血纖維蛋白膠對(duì)照組(FG)的大鼠，其含10毫克的血纖維蛋白原，包含在80微升Hanks緩沖液及20微升(100KIU)牛肺臟抑蛋白酶中，接著立即在同一部位注射100微升的溶液B，其含有40mM的CaCl2及4.9-11.1毫克/毫升的凝血酶。飼養(yǎng)共21天，于第14及21天稱(chēng)重。
于試驗(yàn)第1天起，每日注射對(duì)照組(DI)的大鼠則每日接受12.5微升含有5微克pST的Hanks緩沖液注射，共21日。飼養(yǎng)共21天，于第14及21天稱(chēng)重。
前述Hanks緩沖液的成份如下5.4mM KCl，0.3mM Na2HPO4，0.4mMKH2PO4，4.2mM NaHCO3，1.3mM CaCl2，0.5mM MgCl2，0.6mM MgSO4，137mMNaCl，5.6mM D-葡萄糖，并調(diào)整pH為7.4。三組大鼠于試驗(yàn)第14及21天所測(cè)的體重如下表所示第14天(克數(shù)) 第21天(克數(shù))FG DIFG+pSTFGDIFG+pST20 40 30 3560 5525 40 30 5075 5050 20 45 6535 6540 45 35 6060 4545 20 45 5550 6535 15 50 5530 7030 20 40 5035 6010 40 25 2555 4045 25 25 6040 403045平均 33 30 36 5149 54實(shí)例二隨機(jī)選取16只平均體重為50公斤的豬，分成試驗(yàn)組及對(duì)照組。將2.5毫升的溶液A與0.4毫升的溶液B混合，其中溶液A含有70毫克的豬生長(zhǎng)激素(購(gòu)自UCLA醫(yī)學(xué)中心的Parlow’s實(shí)驗(yàn)室)及300毫克含約150毫克血纖維蛋白原的豬血漿，包含在PBS溶液(20mM磷酸鹽，230mMNaCl，pH7)中；而溶液B則含有2MCaCl2及得自豬血清的500IU/毫升凝血酶。將混合所得的半膠質(zhì)物注射于試驗(yàn)組各豬的肩胛骨處。對(duì)照組則不使用豬生長(zhǎng)激素及生物膠。
使用適于此階段豬使用的一般商用飼料喂食豬。隔周稱(chēng)量各豬的體重，共七周，并于稱(chēng)重時(shí)采取血液檢體。
分析血液檢體的pH值，尿素氮，葡萄糖及豬生長(zhǎng)激素濃度。于第三周時(shí)屠宰半數(shù)的對(duì)照組及受試組豬，并于試驗(yàn)終了時(shí)(第七周)屠宰剩余半數(shù)的豬，于屠宰時(shí)，采取腰眼部位及背部脂肪的樣本。并以專(zhuān)家評(píng)判團(tuán)進(jìn)行屠體的官能分析，包括肉品色澤、脂肪組織含量及其它肉質(zhì)指數(shù)。另記錄飼料換肉率、精肉增重量、平均飼料攝取量及總增重量。進(jìn)行所得結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析。
權(quán)利要求
1.一種生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合物，其含有有效量的生物活性蛋白質(zhì)，及其量足以延遲該生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白膠。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的生物活性蛋白質(zhì)選自生長(zhǎng)激素、胰島素、干擾素及細(xì)胞因子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述的生物活性蛋白質(zhì)為豬生長(zhǎng)激素。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述的豬生長(zhǎng)激素為重組豬生長(zhǎng)激素(rPST)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述的重組豬生長(zhǎng)激素的有效量為20-50毫克/毫升。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述的重組豬生長(zhǎng)激素的有效量為25毫克/毫升。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的組合物，它含有相當(dāng)于使用30-60毫克血纖維蛋白原/毫升及10-100國(guó)際單位/毫升凝血酶所產(chǎn)生的血纖維蛋白膠。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，它含有相當(dāng)于使用50毫克血纖維蛋白原/毫升及60國(guó)際單位/毫升凝血酶所產(chǎn)生的血纖維蛋白膠。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，它可維持至少約21天的所述的生物活性蛋白質(zhì)的有效血中濃度。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，它可維持約30天的所述的生物活性蛋白質(zhì)有效血中濃度。
11.一種生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合，它含有有效量的生物活性蛋白質(zhì)，并且其量足以延遲所述的生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白原及凝血酶。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合，其中所述的生物活性蛋白質(zhì)選自生長(zhǎng)激素、胰島素、干擾素及細(xì)胞因子。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合，其中所述的生物活性蛋白質(zhì)為豬生長(zhǎng)激素。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合，其中所述的豬生長(zhǎng)激素為重組豬生長(zhǎng)激素。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合，其中所述的重組豬生長(zhǎng)激素的有效量為20-50毫克/毫升。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的組合，其中所述的重組豬生長(zhǎng)激素的有效量為25毫克/毫升。
17.根據(jù)權(quán)利要求11-16中任意一項(xiàng)所述的組合，它含有30-60毫克的血纖維蛋白原/毫升及10-100國(guó)際單位/毫升的凝血酶。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的組合，它含50毫克的血纖維蛋白原/毫升及60國(guó)際單位/毫升的凝血酶。
19.根據(jù)權(quán)利要求11-16中任意一項(xiàng)所述的組合，其中所述的生物活性蛋白質(zhì)與血纖維蛋白原系預(yù)經(jīng)混合，而含于同一容器中。
20.根據(jù)權(quán)利要求11-16中任意一項(xiàng)所述的組合，其中所述的生物活性蛋白質(zhì)與血纖維蛋白原包含在不同容器中。
21.根據(jù)權(quán)利要求11-16總?cè)我庖豁?xiàng)所述的組合，它另外含有第IIa族堿土金屬成份。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的組合，其中所述的第IIa族堿土金屬成份為氯化鈣。
23.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合，它可維持至少約21天的所述的生物活性蛋白質(zhì)有效血中濃度。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合，它可維持約30天的所述的生物活性蛋白質(zhì)有效血中濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合物，其含有有效量的生物活性蛋白質(zhì)，其量足以延遲該生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白膠。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種生物活性蛋白質(zhì)的延遲釋放組合，其含有有效量的生物活性蛋白質(zhì)，其量足以延遲該生物活性蛋白質(zhì)釋放的血纖維蛋白原及凝血酶。
文檔編號(hào)A61K38/00GK1434703SQ00819010
公開(kāi)日2003年8月6日 申請(qǐng)日期2000年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月24日
發(fā)明者W·T·H·張 申請(qǐng)人:利統(tǒng)股份有限公司